微圖案細胞有絲分裂高通量跟蹤表征系統(tǒng)，高通量細胞有絲分裂跟蹤表征系統(tǒng)

MITosis高通量跟蹤表征系統(tǒng)

在一個平臺內(nèi)處理所有必要的圖像處理步驟，以檢測和分析通過有絲分裂接種在微圖案上的單個細胞。

通過使用延時熒光顯微鏡對活細胞進行可重復(fù)的分析，微圖案的使用已經(jīng)改變了動態(tài)生物過程的研究。 借助微圖案，可以對數(shù)千個單個細胞進行高效并行成像，從而使該方法適合篩選項目。

對微模式上的單個有絲分裂細胞進行高通量分析，從而準(zhǔn)確有效地允許從延時記錄中自動確定紡錘體定位。

有絲分裂期間發(fā)生的動態(tài)事件，包括主軸定位，可以使用延時顯微鏡進行忠實監(jiān)測。 紡錘體定位是動物發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)過程中細胞分裂軸正確定位的基礎(chǔ)。 在無脊椎動物模型系統(tǒng)中進行的正向遺傳和功能基因組篩選導(dǎo)致鑒定出被證明廣泛需要紡錘體定位的成分，包括在人類細胞中。 相比之下，直接在哺乳動物細胞中進行篩選以識別對該過程重要的基因的篩選較少，并且沒有一個篩選依賴于對活細胞的監(jiān)測。 因此，很可能尚未完了解控制哺乳動物系統(tǒng)中紡錘體定位的機制。 為了這一空白，我們提供了一個基于 siRNA 的屏幕，用于使用延時顯微鏡在人類細胞中定位中期紡錘體的新型調(diào)節(jié)器。

A：表達 mCherry::histone 2B 的單個 HeLa 細胞示例，生長在涂有纖連蛋白 Alexa fluor 555 的 L 形微圖案上，并使用延時顯微鏡進行監(jiān)測。頂部：延時顯微鏡實驗的原始數(shù)據(jù)；時間以小時表示；底部：相應(yīng)的示意圖。請注意，示意圖中顯示的電池輪廓僅用于說明目的，并未通過實驗進行監(jiān)測。播種后，間期細胞在微圖案上定向，使細胞核位于 L 的兩個臂之間的中央。在有絲分裂中細胞變圓后，中期細胞板與 L 的臂成 ~ 45° 角定位L 形微圖案。乙：在涂有 L 形微圖案的 96 孔板中生長的細胞視野示例，使用延時顯微鏡進行監(jiān)測；時間以小時表示。在較低放大倍率視圖中用藍色插圖突出顯示的區(qū)域在下方放大，以說明必須由 TRACMIT 區(qū)分的不同類別的細胞：綠色（可分析）：細胞正確定位在微圖案上并在記錄期間分裂；紅色 [ 1 ]，空：微圖案上沒有細胞；紅色 [ 2 ]，擁擠：微圖案上有一個以上的細胞；紅色 [ 3 ]，錯誤位置：L 的一只手臂上的細胞；紅色 [ 4 ]，不分裂：細胞在記錄過程中不分裂。插圖中的比例尺 = 10μm

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