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氮自由基(DPPH)清除能力測(cè)試試劑盒
（A001-96T 酶標(biāo)板法）

一.測(cè)定原理

DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，有一個(gè)單電子，在517nm下有強(qiáng)吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個(gè)電子使此單電子配對(duì)，其吸收會(huì)消失褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比。即反應(yīng)物清除氮自由基的能力與試劑在517nm的吸光值成反比。

二.試劑組成

試劑一：DPPH試劑100μL支

試劑二：100μg/mL 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液 1ml×1支

三.儲(chǔ)存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存6個(gè)月。

四.試劑的配制

試劑一：37℃平衡20min以上，待試劑融化后，在試劑瓶中加入10ml 95%乙醇或無(wú)水乙醇，劇烈震蕩使試劑充分溶解。

注意：溶解一定要充分，如有條件可采用超聲波助溶。

試劑二應(yīng)用液：根據(jù)是否需要制作陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線有兩種配制方法。

1. 如僅需要將維生素C作為質(zhì)控品，可取100μL 試劑二，加入900μL樣品稀釋液，充分混勻，配制成10μg/mL 維生素C；

2. 如需測(cè)定維生素C的IC₅₀，可分別移取0，2，5，10，15，20，25，30，40，50μL 試劑二于空離心管中，再依次加入100，98，95，90，85，80，75，70，60，50 μL樣品稀釋液，充分混勻。配制成0，2，5，10，15，25，30，40，50 μg/mL 維生素C樣品。

五.操作步驟

充分混勻，室溫避光靜置30min使之充分反應(yīng)。517nm處采用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值。

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