熒光型RT-RAA核酸擴(kuò)增試劑凍干顆粒惠誠現(xiàn)貨

重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴(kuò)增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一種恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)。RT-RAA先利用逆轉(zhuǎn)錄酶將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA，從細(xì)菌或真菌中獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結(jié)合，形成重組酶/引物復(fù)合體，侵入RNA-cDNA雙鏈核酸模板，在侵入位點(diǎn)重組酶將雙鏈打開，同時(shí)單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合到被重組酶打開的單鏈上，維持雙鏈模板處于開鏈狀態(tài)。重組酶/引物復(fù)合體開始對(duì)雙鏈進(jìn)行掃描，當(dāng)引物在模板上搜索到與之匹配的互補(bǔ)序列時(shí)，重組酶/引物復(fù)合體解體，DNA聚合酶結(jié)合到引物的3’端，開始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板，最終擴(kuò)增產(chǎn)物以指數(shù)級(jí)增長，完成靶標(biāo)基因的擴(kuò)增。經(jīng)過熒光標(biāo)記的探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合，當(dāng)探針被核酸內(nèi)切酶酶切后，與生物(空)素標(biāo)記的引物共同擴(kuò)增形成兩端有熒光標(biāo)記及生物(空)素標(biāo)記的片段，可用電泳法、熒光法或通用型核酸(空)檢測(cè)試紙條進(jìn)行判讀。RAA凍干顆粒具有快速、靈敏度高以及特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分已混合并冷凍干燥成核酸擴(kuò)增試劑，操作簡便，易于保存。

訂購信息：

檢測(cè)原理：

RAA凍干顆粒是基于重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴(kuò)增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技術(shù)開發(fā)的恒溫核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑，在39～42℃恒溫條件下特異識(shí)別并擴(kuò)增目標(biāo)樣本的核酸片段，可配合電泳法、實(shí)時(shí)熒光或通用型核酸(空)檢測(cè)試紙條進(jìn)行檢測(cè)判斷。

產(chǎn)品用途：

RAA凍干顆?？蓱?yīng)用于核酸RNA/DNA 的快速擴(kuò)增，根據(jù)需求選擇產(chǎn)品及規(guī)格。

儲(chǔ)存及有效期：

本產(chǎn)品存儲(chǔ)于2~28℃、干燥、避光條件下，有效期為12 個(gè)月。

熒光型RT-RAA核酸擴(kuò)增試劑凍干顆?；菡\現(xiàn)貨

引物設(shè)計(jì)：

RAA核酸擴(kuò)增技術(shù)對(duì)引物設(shè)計(jì)的要求與常規(guī)PCR引物設(shè)計(jì)有一定的區(qū)別。由兩條寡核苷酸組成一對(duì)引物，分別特異性識(shí)別一個(gè)核酸目標(biāo)物的上下游核苷酸序列；引物長度在28-35 nt之間，序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復(fù)序列和內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)；引物Tm值不作為設(shè)計(jì)時(shí)主要考慮因素。建議在開展RAA（基礎(chǔ)型）擴(kuò)增反應(yīng)之前，先進(jìn)行引物的篩選試驗(yàn)，以便得到較高的檢測(cè)靈敏度。

探針設(shè)計(jì)建議方法：探針長度在46-52 nt之間，序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基；探針的5’端用一種抗原標(biāo)記物標(biāo)記，通常為FAM基團(tuán)或羧基熒光素；內(nèi)部含有堿基核苷酸類似物替換核苷酸（例如四氫呋喃殘基THF-有時(shí)稱為'dSpacer'）；3’末端有聚合酶延伸阻斷基團(tuán)（例如C3-spacer，磷酸基或雙脫氧核苷酸）。

產(chǎn)品說明：

1. 本產(chǎn)品是“Ready to Use"即用型 RAA/RT-RAA 凍干顆粒；含有除引物和探針外所有的反應(yīng)要素，如重組酶、DNA 聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。

2. 試劑盒檢測(cè)下限為 10-100copies/測(cè)試（依據(jù)引物篩選優(yōu)化程度和檢測(cè)手段）。

3. RAA試劑，僅擴(kuò)增DNA，RT-RAA能同時(shí)擴(kuò)增DNA和RAA。

4. 基礎(chǔ)型試劑，適用于電泳法分析條帶。

5. 熒光型試劑：含有外切酶（EXO）可使用探針法，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光監(jiān)測(cè)。

6. 試紙條型試劑：含有外切酶適用于熒光法和試紙條法分析擴(kuò)增產(chǎn)物。

適用儀器：

恒溫金屬浴、恒溫水浴鍋、熒光PCR儀。

結(jié)果分析與判定： 

可以根據(jù)瓊脂糖電泳、試紙條或熒光法判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑條檢測(cè)，推薦使用免開蓋的裝置進(jìn)行試紙條檢測(cè)，避免氣溶膠污染。 

2. 開始檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書全文，并嚴(yán)格按照要求進(jìn)行操作。 

3.不同類型樣品所提取的核酸含量和純度有差異，可能導(dǎo)致擴(kuò)增效率不同。 

4.當(dāng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、試劑、儀器或配件存在陽性物質(zhì)（例如質(zhì)粒、擴(kuò)增產(chǎn)物等）污染，或樣本間存在交叉污染的情況時(shí)，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

5. 務(wù)必保證試劑保存、配制或運(yùn)輸?shù)卯?dāng)，否則可能導(dǎo)致試劑檢測(cè)性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 

6. 陽性對(duì)照為質(zhì)粒，適用于評(píng)價(jià)本試劑核酸擴(kuò)增性能。 

7. 請(qǐng)嚴(yán)格按照基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范進(jìn)行操作。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，檢測(cè)過程中所產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)按照相關(guān)規(guī)范進(jìn)行處理。

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