單細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見又必須掌握的一門技術(shù)，看起來是非常簡(jiǎn)單的一項(xiàng)操作，但其實(shí)卻經(jīng)常會(huì)遇到：細(xì)胞分布不均勻的情況。要知道把用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞鋪的均勻且密度適宜，不僅看起來賞心悅目，更是決定了我們實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。
單細(xì)胞鋪板的常見問題解答：
1、細(xì)胞計(jì)數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差？
考慮細(xì)胞沉降導(dǎo)致懸液不勻；懸液體積過大或過?。幌♂尡稊?shù)太高或太低等原因造成。
2、如何克服細(xì)胞懸液不均勻的問題？
盡量將細(xì)胞吹打?yàn)閱蝹€(gè)，防止抱團(tuán)，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。
3、一般加多少細(xì)胞懸液合適？
由于加入計(jì)數(shù)室的量，過少會(huì)導(dǎo)致計(jì)數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡，過多則會(huì)使得計(jì)數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計(jì)數(shù)板，使得高度變高，體積變大；計(jì)數(shù)室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。
4、計(jì)數(shù)時(shí)，細(xì)胞稀釋倍數(shù)如何控制？
若是計(jì)數(shù)室細(xì)胞過稀或過密，會(huì)造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細(xì)胞/ml。如一般10cm皿的細(xì)胞約300-500萬個(gè)，一些細(xì)胞個(gè)體小也能達(dá)到1000-2000萬，可根據(jù)所需細(xì)胞數(shù)目取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計(jì)數(shù)。舉例來說可將100ul細(xì)胞懸液加入到900ul培養(yǎng)基中，混勻后進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)所得乘以10即為實(shí)際細(xì)胞密度。
5、計(jì)數(shù)的原則有哪些？
計(jì)數(shù)時(shí)對(duì)壓在外圈邊線的細(xì)胞遵循“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右”的統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，遇到兩個(gè)以上的細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)計(jì)為一個(gè)細(xì)胞
6、對(duì)于某些容易聚團(tuán)的細(xì)胞，該怎么辦？
對(duì)于容易聚團(tuán)的細(xì)胞，盡管當(dāng)時(shí)搖勻了，但是靜置30min后，取出后將細(xì)胞培養(yǎng)板后，肉眼即可見嚴(yán)重的細(xì)胞居中抱團(tuán)現(xiàn)象，比如乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231。
對(duì)于這種細(xì)胞解決辦法：從個(gè)人經(jīng)驗(yàn)來看，若是時(shí)間允許的話，可以降低接種密度，可以隔一天細(xì)胞多了再進(jìn)行藥物處理或者劃線等。
7、如何避免每個(gè)孔之間的細(xì)胞不均勻？
單細(xì)胞鋪板速度盡量快點(diǎn)，在加完半邊板后，需要再次將培養(yǎng)皿內(nèi)剩余的細(xì)胞懸液充分混勻再繼續(xù)鋪板。
