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中級(jí)會(huì)員 | 第7年

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單細(xì)胞鋪板在鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法

時(shí)間：2022/4/20閱讀：946
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       單細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中最常見又必須掌握的一門技術(shù)，看似簡單，我們卻經(jīng)常遇到：如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象，導(dǎo)致我們只能扔掉，重新鋪板。既耽擱時(shí)間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。
　　單細(xì)胞鋪板要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞，手法如下：
　　1、細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min；
　　2、在滴入細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入；
　　3、滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次；4、置于水平臺(tái)上，放置10-20分鐘；5、放入孵箱。
　　其實(shí)單細(xì)胞鋪板不一定都需要單個(gè)單個(gè)的那么均勻，比如做免疫熒光時(shí)，因?yàn)檫@個(gè)樣子可以同時(shí)檢測到單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)，另外又可以照一點(diǎn)低倍的用作于統(tǒng)計(jì)，所有的細(xì)胞都在一個(gè)環(huán)境中。特別說明一下：這里的多也只是相對(duì)于多，細(xì)胞也是單層的。
　　鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法如下：
　　1、細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗，直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基；
　　2、放置30s-1min后，前后搖晃5-8次；
　　3、放在水平臺(tái)上靜置2-5min；
　　4、放入孵箱。
　　一般在提取蛋白或者提取RNA的時(shí)候有時(shí)會(huì)這樣鋪板，因?yàn)橛行┘?xì)胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的，想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：
　　1、細(xì)胞板子不需要提前潤洗，從中間滴入進(jìn)去后；
　　2、把板子朝一個(gè)方向順時(shí)針或者逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3-5圈；
　　3、水平臺(tái)上靜置2-5min；
　　4、放入孵箱。

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