當前位置:Bio-Techne>>技術文章>>單細胞鋪板的選擇分享
近年來,單抗藥物的開發(fā)領域又被推上了一個新的高度,越來越多的公司都紛紛投入到這個熱潮當中,隨之而來的相關法規(guī)的要求也是越來越嚴格。在眾多的要求當中,fda對藥物來源的單克隆源性的要求非常嚴格,這就要求生產和研發(fā)的企業(yè)在細胞株開發(fā)階段做到嚴格的單克隆驗證。
目前市面上已經有幾款孔板掃描設備能夠得到fda的認可,他們的數據可以用來作為單克隆源性的證明。在這里我們要討論的是在驗證前的分離階段,如何快速、準確、的獲得單細胞。除了上面提到的有限稀釋法之外,昂貴的流式細胞分選儀也可以用來作為單細胞鋪板工具之一,當然流式除了操作復雜,需要專人維護之外,分選得到的細胞常常復蘇比例比較低。在流式分選中,細胞的損傷比較大。
單細胞分離儀為細胞鋪板提供了全新解決方案。該設備采用*的微流體技術能夠實現快速,,準確的細胞鋪板工作。并且分離過程輕柔,不會影響細胞的后續(xù)生長。能廣泛應用于單抗開發(fā)中的cld環(huán)節(jié),以及單細胞測序等。
單細胞分離用于細胞鋪板的原理如下:
將細胞通過一次性的芯片上端加樣孔,注入到芯片腔體中。單細胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域,機器能對細胞進行識別,去除掉細胞碎片,死細胞以及狀態(tài)較差的細胞,使得終落到孔板中的細胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠捕獲每一個活性細胞,終形成1ul體積的液滴,輕柔地落進孔板中。整個過程對細胞的損傷可以忽略不計,所以分選得到的細胞絕大多數的細胞都能再次分裂生長。
整個過程非常快速,一般一塊9孔板分選需要1min左右,單個細胞一個孔的比例在85%~90%,一般細胞復蘇的比例在40%~65%(復蘇比例跟細胞本身有很大關系)。
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