上海單細胞分離巧妙的新方法在不斷涌現(xiàn)
上海單細胞分離是單細胞研究中困難的步驟之一，目前的單細胞分離策略主要分為三類：手動分離、熒光激活的細胞分選和微流體技術(shù)。
在進行單細胞轉(zhuǎn)錄分析之前，我們需要確定自己拿到了正確的細胞。如果你想要的細胞已經(jīng)處于懸浮狀態(tài)（比如循環(huán)腫瘤細胞），而且含量相對比較豐富，那么流式細胞分析將是你的理想選擇。如果樣本是實體組織，我們可以用酶分解掉膠原和其他細胞外蛋白。不過酶學消化對細胞影響較大，甚至可能改變基因轉(zhuǎn)錄情況。把組織細胞制成懸液之后，我們就可以通過特異性的熒光標簽分離出自己想要的細胞。進一步拿到單細胞是比較棘手的一步，可能需要用到微流體設備。
將細胞分散到懸液中，會失去它們在組織里的位置信息。如果你想要了解單細胞所處的環(huán)境，就得使用激光捕獲顯微切割技術(shù)，上海單細胞分離通過掃描組織切片定位目的細胞，并將其提取出來。操作者需要非常小心，以免切到細胞或細胞核。數(shù)量為的細胞只能用毛細管等器具手動獲取。離法的難度與細胞或個體的大小成反比，較大的微生物如藻類、原生動物較容易，個體較小的細菌則較難。
在顯微鏡下使用單孢子分離器進行機械操作，挑取單孢子或單細胞進行培養(yǎng)。也可以采用特制的毛細管在載玻片的瓊脂涂層上選取單孢子并切割下來，然后移到合適的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。上海單細胞分離對操作技術(shù)有比較高的要求，多限于高度專業(yè)化的科學研究中采用。當然，除了成熟的方法，巧妙的新方法也在不斷涌現(xiàn)，能以更高的準確性和特異性來分離單細胞。
