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簡單介紹如何選擇抗體

2023-12-27 閱讀(100)

分析了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體,至少兩方面因素需要考慮待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域:抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來,其中的免疫原包括:全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體(如:細(xì)菌)或細(xì)胞,抗體說明書一般都有免疫原的描述,如果打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區(qū)域,則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FCM流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白,則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。

樣本的提取或處理過程:某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理,例如:許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本,另一方面,某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí),應(yīng)注意某些抗體只識(shí)別未固定的冷凍的組織,而另一些抗體則適用于無需抗原修復(fù)解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織,這些都會(huì)在抗體說明書上應(yīng)用部分標(biāo)示出來。



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