詳細介紹
細胞名稱 SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞源自CV-1細胞株,經(jīng)轉染編碼野生型T抗原、起始點缺陷突變的SV40得到;細胞中整合有SV40基因組完整早期區(qū)段的單個拷貝。該細胞表達T抗原,適用于需要SV40T抗原表達的載體的轉染;保留SV40溶細胞性生長的特性;支持40℃時溫度敏感性A209病毒的復制;支持早期區(qū)段缺失的SV40純體的復制。因含有SV40的DNA序列,該細胞需要在2級生物安全柜中操作。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-E-Selectin/FITC 熒光素標記E選擇素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Myf6/FITC 熒光素標記生肌調節(jié)因子6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C19orf24 19號染色體開放閱讀框24抗體 規(guī)格 0.2ml
Socs 1 (suppressor of cytokine signaling 1) 細胞激酶信號-1抑制劑(抗原) 0.5mg
HEATR5B 英文名稱: HEAT重復內含蛋白5B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RPA70 單鏈結合蛋白70抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Myf6/FITC 熒光素標記生肌調節(jié)因子6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ILK-1(mouse) 小鼠整合素連接激酶1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser104/106) 磷酸化雌激素受體α抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MSK1/RPS6KA5 有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體 規(guī)格 0.2ml
HG(Human Herpes Gestation) ELISA Kit 人皰疹抗體 96T
phospho-SYT6 (Thr418) 英文名稱: 磷酸化突觸蛋白6抗體 0.1ml
CK16 英文名稱: 細胞角蛋白16抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser104/106) 磷酸化雌激素受體α抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-human IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗人IgM 0.1ml
GM2A 英文名稱: 神經(jīng)鞘脂激活蛋白3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ALOXE3 表皮型脂氧合酶3抗體(魚鱗病相關蛋白) 規(guī)格 0.2ml
Anti-KLK3/FITC 熒光素標記激肽釋放酶3/舒血管素3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-SLK/Fyn/FITC 熒光素標記酪氨酸蛋白激酶Fyn(同步原癌基因)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1培養(yǎng)Anti-Cyclin H/FITC 熒光素標記周期素H抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光素標記白細胞免疫球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Caspase 4/Caspase 11 半胱胺酸蛋白酶4/11抗體 規(guī)格 0.2ml
ELK1 細胞轉錄因子ELK1抗原 0.5mg
HCCS 英文名稱: 全細胞色素C合成酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Sin3b 轉錄抑制蛋白Sin3b抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光素標記白細胞免疫球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml