詳細介紹
人神經(jīng)母細胞瘤;SH-SY5Y價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 人神經(jīng)母細胞瘤;SH-SY5Y價格
形態(tài)特性 上皮樣細胞
品牌 貼壁懸浮混合生長
特征特性 該細胞系來源于1970年建立的一神經(jīng)母細胞瘤患者的轉(zhuǎn)移骨瘤灶細胞SK-N-SH經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。 SH-SY5Y細胞的生長密度可高達1X106細胞/cm2,生長成懸浮和貼壁混合生長,有的聚集成細胞叢
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Gluc
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-PKA C (Thr197)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞性抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-human IgG 驢抗人IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
肝細胞生長因子激活物抑制因子抗體 Anti-HAI-1 0.2ml
Dog IgM/Gold 膠體金標記的兔抗犬IgM抗體 0.5ml
FAM55D 英文名稱: FAM55D蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-RSK3 (Thr353/356) 磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體 規(guī)格 0.1ml
Donkey Anti-human IgG 驢抗人IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit 小鼠可溶性CD30Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Thr735) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Ensconsin 上皮細胞微管相關(guān)蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml
BALP ELISA Kit 大鼠骨堿性磷酸酶 96T
MCM5 英文名稱: 染色體維持缺陷蛋白5抗體 0.1ml
ADORA2B 英文名稱: 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體 0.1ml
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Thr735) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta) 壞死因子-β抗原 0.5mg
IL-18 英文名稱: 白細胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Ceruloplasmin 銅藍蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Caspase-9/FITC 熒光素標記白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh TLR2/CD282 Toll樣受體2抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-DcR3/FITC 熒光素標記抗誘捕受體3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CAD(Human caspase activated deoxyribonuclease0 ELISA Kit 人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-NMDAR2B (Tyr1472) 磷酸化谷氨酸受體2B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh IGF2BP3/IMP3 胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml
AT- III (Mouse Anti-Thrombin III )ELISA Kit 小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體 96T
phospho-PKA beta(Ser338) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶Aβ抗體 0.1ml
Chromogranin B 英文名稱: 嗜鉻粒素B抗體 0.1ml
Anti-Phospho-NMDAR2B (Tyr1472) 磷酸化谷氨酸受體2B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml