詳細(xì)介紹
人胚胎眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;HFTF價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 人胚胎眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;HFTF價(jià)格
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 北京眼科研究所建系。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2~1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P9
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體 46,XX
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
trypsin ELISA Kit 大鼠胰蛋白酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AU5 tag/FITC 熒光素標(biāo)記AU5 tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh F1 operon positive regulatory protein(NT) 肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體(N端) 規(guī)格 0.2ml
NE (Rabbit neutrophil elastase) ELISA Kit 兔子中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶 96T
10-Mar 英文名稱: 膜相關(guān)環(huán)指蛋白10抗體 0.1ml
ATG13 英文名稱: 自噬相關(guān)蛋白13抗體 0.2ml
Anti-AU5 tag/FITC 熒光素標(biāo)記AU5 tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH) ELISA Kit 人煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PI3KCA/PtdIns 3 kinase p110 磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Histone H2A 組蛋白H2A抗體 規(guī)格 0.2ml
LAT(Mouse Linker for activation of T cell) ELISA Kit 小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白 96T
PAP2B 英文名稱: 磷脂酸磷酸酶2b抗體 0.1ml
Cytokeratin 3+12 英文名稱: 細(xì)胞角蛋白3+12抗體 0.2ml
Anti-PI3KCA/PtdIns 3 kinase p110 磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
血清肝膽酸(cholyglycine)ELISA試劑盒通用96T1.56-100 ng/mL小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒,英文名:AR ELISA Kit人G蛋白信號10調(diào)節(jié)物(RGS-10)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠支鏈α-酮酸脫氫酶(BCKDK)ELISA試劑盒,英文名:BCKDK ELISA Kit人胞外超氧化物歧化酶(SOD3)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 U/L大鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白τ(MAPτ)ELISA試劑盒,英文名:MAPτ ELISA Kit人鞘氨醇1磷酸酯受體4(S1PR4)ELISA試劑盒人96T0.125-8 ng/mL大鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1()ELISA試劑盒,英文名: ELISA Kit人磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶結(jié)合蛋白3(TAB3)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠核因子κB(NFκB)ELISA試劑盒,英文名:NFκB ELISA Kit人泛素激活酶(NEDD8-activating enzyme E1 catalytic subunit)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素受體2(CRHR2)ELISA試劑盒,英文名:CRHR2 ELISA Kit大鼠S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)ELISA試劑盒,英文名:S100A8 ELISA Kit
人C-C 趨化因子受體5(C-C CKR-5)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒,英文名:FⅧAg ELISA Kit豚鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒,英文名:IFN-α ELISA Kit人類泛素蛋白ATG12(Ubiquitin-like protein ATG12)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒,英文名:SAA ELISA Kit人α-甲基?;o酶a消旋酶(AMACR)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL小鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA試劑盒,英文名:NF ELISA Kit人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒人96T1.25-80 ng/mL小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒,英文名:ACA-IgG ELISA Kit人磷酸酶結(jié)合蛋白1(CABIN1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒,英文名:HMGB-1 ELISA Kit人Ⅸ型膠原α3(COL9α3)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒,英文名:IL-1sRⅡ ELISA Kit
豬血清封閉液 10ml Gibco原料,2%血清
VAMP-1+2+3 英文名稱: 囊泡相關(guān)膜蛋白1,2,3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-CASC3(Tyr181) 磷酸化易感候選基因3抗體 規(guī)格 0.1ml
phospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5, Human, mo, rat, horse, bovine, rabbit, pig, dog 磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
phospho-DNA PKcs (Thr2647) 英文名稱: 磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體 0.1ml
Anti-AFP 甲胎蛋白單克隆抗體(包被)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
PPAR- Alpha(Mouse peroxisome proliferators activator receptors alpha) ELISA Kit 小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體αMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Cav-1/FITC 熒光素標(biāo)記抗小凹蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EID1 乙?;D(zhuǎn)移酶EID1抗體 規(guī)格 0.2ml
(CTX- I )ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原C端肽 96T
MESP1 英文名稱: 心血管發(fā)育中胚層相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
phospho-ALK (Tyr1586) 英文名稱: 磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體 0.1ml
Anti-Cav-1/FITC 熒光素標(biāo)記抗小凹蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml