我司供應的生化檢測試劑盒，僅供科研使用。

商品介紹：

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

通用規(guī)則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

實驗通用規(guī)則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

CNE1, 人鼻咽癌細胞系     Human

HT-29, 人結(jié)腸癌細胞     Human

T24, 人膀胱癌細胞     Human

5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細胞系     Human

HCT116, 人結(jié)直腸癌細胞     Human

LncaP, 人前列腺癌細胞     Human

6-10B, 人鼻咽癌細胞系     Human

lovo, 人結(jié)腸癌細胞     Human

DU 145, 人前列腺癌細胞     Human

Hep-2, 人喉癌細胞系     Human

MDA-MB-231, 人乳腺癌細胞     Human

HL-60, 人早幼粒白血病細胞     Human

CaEs-17, 人食管癌細胞株     Human

MG-63, 人骨肉瘤細胞     Human

kasumi-1, 人白血病細胞株     Human

RBE, 人肝膽管癌細胞     Human

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞     Human

KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細胞     Human

QGY-7701, 人肝癌細胞     Human

PANC-1, 人胰腺癌細胞     Human

Girdin    肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體     根霉屬的菌

AKAP2    蛋白激酶A2抗體     戴爾根霉

AT2R2    血管緊張素Ⅱ受體2抗體     科恩根霉

ASH1L    ASH1蛋白抗體     華根霉

AADACL2    芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體     白腐菌

AAMP    血管內(nèi)皮細胞遷移蛋白抗體     蕁麻青霉

AKR1B10    醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體     小刺青霉

AKR1C2    膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體     婁地青霉

ANGPTL3    血管生成素樣蛋白3抗體     產(chǎn)紫青霉

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶線粒體抗體     特異青霉

phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體     淡紫青霉

ATG16L2    自噬體ATG16L2蛋白抗體     島青霉

ACPT    睪丸酸性磷酸酶抗體     灰黃青霉

Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗體     園弧青霉=桔灰青霉

AKIP    極光激酶A相互作用蛋白1抗體     頂青霉

APOL6    載脂蛋白樣蛋白6抗體     黃綠青霉

ARTS    凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體     產(chǎn)黃青霉

A2LD1    A2LD1蛋白抗體     阿達青霉

輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體     擬青霉

AADAC    芳香乙酰胺脫乙酰基酶抗體     棉鈴蟲擬青霉

AADACL4    芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體     玫煙色擬青霉

AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體     露濕漆斑菌

測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標本后和加結(jié)合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。