詳細介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
產品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 轉基因品系油菜RT73染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | RT 73 dye qPCR kit for transgenic rapeseed |
貨號 | YSP96698 |
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
反應五要素:
產品僅用于科研參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , FITC Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , FITC偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , Cy5 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , Cy5偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , Cy3 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , Cy3偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , Biotin Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , Biotin偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , AbFluor!" 680 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , AbFluor!" 680偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , AbFluor!" 647 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , AbFluor!" 647偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , AbFluor!" 594 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , AbFluor!" 594偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , AbFluor!" 555 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , AbFluor!" 555偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , AbFluor!" 488 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , AbFluor!" 488偶聯(lián)
AntiβTubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) , AbFluor!" 405 Conjugated βTubulin小單克隆(3G6) , AbFluor!" 405偶聯(lián)
EDIL3 表皮生長因子樣重復折疊1結構域蛋白3 * 0.2ml Deoxycorticosterone acetate
GLMN/FK506 binding protein associated protein FK506結合蛋白相關蛋白(他克莫司相關蛋白) * 0.2ml TetrahydroLBiopterin (dihydrochloride)
Aryl Hydrocarbon Receptor/AHR 芳香烴受體 * 0.2ml Ambrisentan
MEOX 2 間充質同源盒蛋白2 * 0.2ml Ambrisentan
EphA3/Eph receptor A3 酪蛋白激酶受體A3 * 0.2ml Dronedarone HCL
EphA6/Eph receptor A6 酪蛋白激酶受體A6 * 0.2ml Dronedarone
EphA7/Eph receptor A7 酪蛋白激酶受體A7 * 0.2ml Ranolazine HCl
EphA8/Eph receptor A8 酪蛋白激酶受體A8 * 0.2ml Ranolazine HCl
轉基因品系油菜RT73染料法qPCR試劑盒DIP13β抗體 英文縮寫:DDIT3
胎盤和前列腺相關蛋白DLG5抗體 英文縮寫:DDIT4
接頭蛋白DOK7抗體 英文縮寫:DDIT4L
睪丸特異性DMRT3蛋白抗體 英文縮寫:DDRGK1
橋粒芯糖蛋白2抗體 英文縮寫:DDX19B
溶酶體絲氨酸蛋白酶DPP2抗體 英文縮寫:DDX23
Notch信號通路Delta樣配體4抗體 英文縮寫:DDX3
動力相關蛋白1抗體 英文縮寫:DDX3Y
形態(tài)發(fā)生紊亂關聯(lián)激活因子1抗體 英文縮寫:DDX4
磷酸化DNA甲基轉移酶1抗體 英文縮寫:DDX5