詳細(xì)介紹
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix
(2mM)
4 μl
引物1(10pM)
2 μl
引物2(10pM)
2 μl Taq
酶 (2U/μl)
1 μl DNA
模板(50ng-1μg/μl)
1 μl
加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:嗜衣原體通用PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Chlamydophila spp. PCR
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
相關(guān)產(chǎn)品:
轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因PCR檢測(cè)試劑盒
轉(zhuǎn)基因植物TETR基因PCR檢測(cè)試劑盒
雞滑液囊支原體(MS)核酸檢測(cè)試劑盒
雞馬立克病毒(MDV)核酸檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2 .對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)3 .10×PCR Buffer4 .2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM5 .Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl Taq 酶(2U/μl) 1μlDNA 模板(50ng-1μg/μl)???1 μl |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4
.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
FOXF2: 叉頭蛋白F2抗體 0.2ml
纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1抗體 Anti-FGFR1 0.1ml
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pTyr204)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化原活化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Stathmin 1 (Ser63) 0酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-FITC/Gold 金標(biāo)記兔抗熒光素 (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 ,英文名: IGF-1 ELISA Kit
小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseisletcellaibody,ICAELISAKit 96T/48T
人甲狀腺激素受體β(THRb)免疫試劑盒 Human Thyroid Hormone Receptor β THRb ELISA Kit
Ratbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白H4-K8乙酰化檢測(cè)試劑盒10/20次等
MouseapoproteinB100,apo-B100ELISA試劑盒小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
嗜衣原體通用PCR檢測(cè)試劑盒FADD (Fas-associated protein with death domain) Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
β-酪蛋白(抗體)兔抗山羊、綿羊 Anti-Beta-casein 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-Eg5(Tyr92) 0酸化驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
胎血清(特優(yōu)級(jí)) 500ml Hyclone
ZNF263 英文名稱: 鋅指蛋白263抗體 0.2ml
DYRK2 英文名稱: 雙特異性酪酸0酸化調(diào)節(jié)DYRK2抗體 0.2ml
β-酪蛋白(抗體)兔抗山羊、綿羊 Anti-Beta-casein 0.1ml
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.
血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3.
細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。