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小鼠elisa檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)中的間接法
閱讀：317 發(fā)布時(shí)間：2018-9-26小鼠elisa檢測(cè)試劑盒自從60-70年代問世以來，得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。 Elisa試劑盒生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。
Elisa試劑盒間接法的操作步驟為以下幾點(diǎn)：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4.（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.zui后一遍用DDW洗滌。
7.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
8.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。