J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，表達(dá)多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）證實(shí)了該細(xì)胞株的內(nèi)皮細(xì)胞特性。細(xì)胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌MAdCAM-1和E選擇素。TNF-α、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時(shí)間和濃度依賴。早代數(shù)的未刺激細(xì)胞會(huì)分泌MAdCAM-1和VCAM-1，但找過30代不分泌

產(chǎn)品特點(diǎn)
種屬：小鼠
組織來源：乳腺組織
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞背景描述該細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，表達(dá)多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）證實(shí)了該細(xì)胞株的內(nèi)皮細(xì)胞特性。細(xì)胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌MAdCAM-1和E選擇素。TNF-α、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時(shí)間和濃度依賴。早代數(shù)的未刺激細(xì)胞會(huì)分泌MAdCAM-1和VCAM-1，但找過30代不分泌。細(xì)胞會(huì)組成型分泌ICAM-1，并且表達(dá)量會(huì)在LPS、IL-1和TNF-α刺激下增多。P選擇素在早代數(shù)和晚代數(shù)細(xì)胞中受TNF-α誘導(dǎo)分泌，但30代后分泌量增加。

生長培養(yǎng)基：RPMI-1640(貨號:PM150110)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃

J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞消化法：

實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)胞
試劑、試劑盒    胰蛋白酶酒精PBS
儀器、耗材    超凈工作臺(tái)酒精燈酒精棉球培養(yǎng)箱顯微鏡吸管離心管離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、傳代前準(zhǔn)備
 
1.  預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
 
2.  用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。
 
3.  正確擺放使用的器械，保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。
 
4.  點(diǎn)燃酒精燈，注意火焰不能太小。
 
5.  準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。
 
6.  取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。
 
7.  從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞，注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面，再在鏡下觀察細(xì)胞。
 
8.  打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。
 
9.  稍微搖搖，然后從對側(cè)倒掉培養(yǎng)液，用酒精棉球擦拭后一滴，注意要靠近酒精燈。
 
二、胰蛋白酶消化
 
1.  加入消化液：用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，消化溫度是37℃。
 
2.  顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度，然后讓其停止消化。
 
3.  倒掉消化液加入培養(yǎng)液，棄去胰蛋白酶液，加入新鮮的培養(yǎng)液。注意要在對測加入培養(yǎng)液。
 
三、吹打分散細(xì)胞

1.  吹打制懸：用吸管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。
 
2.  吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10 ml 離心管中。
 
3.  平衡離心：平衡后將離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中，以1 000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘。
 
4.  棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2 ml 培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
 
四、分裝稀釋細(xì)胞
 
1.  分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2~3個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。
 
2.  顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計(jì)數(shù)。注意密度過小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml，后要做好標(biāo)記。
 
五、傳代培養(yǎng)
 
用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2小時(shí)后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25%時(shí)為一個(gè)+，占50%為++，占75%時(shí)為+++。
收起 
注意事項(xiàng)    
1.  嚴(yán)格的無菌操作
 
2.  適度消化：消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。
 
附：0.25% 胰酶（胰蛋白酶，Trypsin）
 
配方：100 ml PBS，0.25 g 胰酶。
 
步驟：先配100 ml PBS。 稱胰酶0.25 g。加入PBS中，低速攪拌。調(diào)pH7.4。過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完。
 
4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞注意：低速很重要，機(jī)械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活；對難消化的細(xì)胞，在上述配方中，加入0.02 g 的EDTA（0.02%）