詳細介紹
產(chǎn)品及特點 大腸桿菌OmniMAX2-T1 Phage Resistant是采用大腸桿菌 JM109 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于 DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。本試劑盒具有下列特點:
1. 使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達 108,-80℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
2. recA1 和 endA1 突變阻止對克隆 DNA 的修飾或?qū)λ拗骶旧?DNA 的重組,提高純化
質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。
3. JM109 菌株基因型:endA1 recA1 gyrA96 thi hsdR17(rk-mk+)relA1
supE44 D(lac-proAB) [F’ traD36 proAB laqlqZ Δ M15 ]
4. 本產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,使用方便,質(zhì)優(yōu)價廉。
規(guī)格及成分 成分 包裝
本產(chǎn)品 0.1mL×10
使用手冊 1 份
運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存,有效期半年。
大腸桿菌OmniMAX2-T1 Phage Resistant使用方法 1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl,可以根據(jù)
實際情況分裝使用。
以下實驗以 50 μl 感受態(tài)細胞為例。
2. 待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA(根據(jù)實際情況加入適量
的 DNA,通常 100 μl 感受態(tài)細胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和),用移液器
輕輕吹打混勻,冰浴 30 分鐘。
3. 42℃熱擊 90 秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置 2-3 分鐘。
4. 每個離心管中加入 450 μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于 37℃
搖床,150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體
瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于 37℃直至液體被吸收,
倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng) 12-16 小時。
注意:
1 涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;
若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少,可取 200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少,
可通過離心(4,000 rpm ,2 分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂
布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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