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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 僅供科研 |
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品及特點
大腸桿菌DH10Bac化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞，適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株，用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，
本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。
DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本
Bacmid 包含一個 mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點和 lac Zα-互補因子。
輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶
位點所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）
含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒
多角體基因啟動子、多克隆位點和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號。當(dāng)含有靶基因 pFastBac
的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后，發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid，提取純化重組
Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲病毒。此外，DH10Bac 細(xì)胞中的
The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補現(xiàn)象，用于重組 bacmid
的藍(lán)白斑篩選。
菌株基因型為：F
- mcrA Δ(mrr
-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1
endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-
rpsL nupG/pMON14272/pMON7124
規(guī)格及成分 成分 編號 包裝
本產(chǎn)品 140576 0.1 mL×10
使用手冊 1 份
運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期半年。
自備試劑 重組質(zhì)粒、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等
大腸桿菌DH10Bac化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用方法 1. 制備含 有如 下抗生 素的 LB 固 體平板 ：50 μ g/mL Kanamycin ，7 μ g/mL
gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據(jù)
實際情況分裝使用。
以下實驗以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒，用移液器輕輕吹
打混勻，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床，
200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋，如分成 3 個稀釋梯度 10-1
,10-2
,10-3。
7. 取 100 μL 的各個梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后，倒置平板，
37℃培養(yǎng) 24-48 小時。
8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，視平板上菌落生長情況決定去留。
注意：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再
涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
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