大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用先用胰蛋白酶短時(shí)間消化、后用膠原酶反復(fù)消化制備而來，細(xì)胞總量T25瓶；細(xì)胞經(jīng)堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1.產(chǎn)品名稱：大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
2.組織來源：視網(wǎng)膜組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介：
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。*神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力強(qiáng)。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細(xì)胞具有不同的特性，在腦和視網(wǎng)膜中，這些內(nèi)皮細(xì)胞具有內(nèi)屏障的功能，在調(diào)節(jié)血管生理狀態(tài)，釋放血管活性物質(zhì)以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用，體外分離培養(yǎng)RCEC對(duì)研究視網(wǎng)膜血管性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機(jī)制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義。
本公司生產(chǎn)的采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD31/vWF免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
M199、FBS、內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-R114）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

T25瓶細(xì)胞處理方法
收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請(qǐng)即時(shí)。并進(jìn)行以下操作：
1.75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2.將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3.預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。
4.顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。
5.①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。
②若細(xì)胞密度較大，達(dá)到80%以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
注：
培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，這時(shí)請(qǐng)?jiān)谂恼蘸髮腋〉募?xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。（這里是針對(duì)原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快并提供圖片，以便售后處理。7天內(nèi)反饋，細(xì)胞本身問題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實(shí)際情況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費(fèi)售后