化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
人腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡElisa試劑盒是一種用于特異性地超高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿、細胞或組織裂解液、或細胞培養(yǎng)上清液中的胰島素的ELISA試劑盒。zui少5μl小鼠血清即可檢測，5μl普通小鼠血清可以導致吸光度比本底增加約0.1(不同小鼠略有不同)，使用10μl小鼠血清檢測可以獲得非常理想的檢測數(shù)據(jù)。本試劑盒不僅適用于常規(guī)的小鼠血清胰島素水平檢測，還特別適合于糖耐量實驗(Glucose tolerance test, GTT)時測定每個時間點的血清胰島素水平。
人腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡElisa試劑盒檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。zui小檢出量為0.1ng/ml，10μl 0.13ng/ml小鼠胰島素標準品可以導致吸光度比本底增加約0.1。與IGF-I、IGF-II、小鼠C肽、大鼠C肽均沒有交叉反應(yīng)，與豬胰島素、綿羊胰島素、大鼠胰島素、牛胰島素及人胰島素分別有628%、256%、146%、110%和195%交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
Insulin即胰島素，是由胰臟內(nèi)的胰島β細胞分泌產(chǎn)生的，分子量約5.8kDa。胰島β細胞首先合成含有信號肽(24個氨基酸殘基)的前胰島素原(preproinsulin)，該信號肽將前胰島素原定位到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。前胰島素原的信號肽被剪切后形成胰島素原(proinsulin)，并被釋放到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，隨后在其中形成3個二硫鍵并正確折疊。隨后胰島素原進入高爾基體，經(jīng)蛋白水解酶的作用，生成C肽(C-peptide)和由A鏈和B鏈通過兩個二硫鍵連接起來的胰島素。1923年和1958年，胰島素的發(fā)現(xiàn)和其氨基酸序列測定都獲得了諾貝爾獎。1965年，中國科學家實現(xiàn)人工全合成結(jié)晶牛胰島素，也是生命科學*的重要成果。胰島素的分泌主要受血糖水平的調(diào)控，血液中葡萄糖水平升高時，更多的葡萄糖通過GLUT2進入β細胞，并產(chǎn)生更多的ATP，ATP水平的升高導致ATP敏感的SUR1/Kir6.2鉀離子通道關(guān)閉，使細胞內(nèi)鉀離子積聚，從而引起細胞膜去極化，引發(fā)電壓門(voltage-gated)鈣離子通道打開，細胞內(nèi)鈣離子濃度升高，zui終導致胰島素的分泌。胰島素的分泌分為兩個時段，*個時段通常受血糖調(diào)控，持續(xù)時間約為10分鐘；第二個時段是一個比較持續(xù)和緩慢的過程，通常分泌的高峰出現(xiàn)在*個時段后的2-3小時，并且不受血糖水平影響。胰島素的分泌不僅受葡萄糖調(diào)控，也受乳糖、核糖、精氨酸和亮氨酸等氨基酸、副交感神經(jīng)釋放的乙酰膽堿、腸道分泌的腸促胰島素(incretin)例如glucagon-like peptide-1 (GLP-1)和glucose-dependent insulinotropic peptide (GIP)、膽囊收縮素(cholecystokinin)、促胰島素分泌的磺脲(sulfonylruea)類藥物等的影響。胰島素的釋放可被緊張時釋放的去甲腎上腺素(norepinephrine)、交感神經(jīng)釋放的兒茶酚胺(catecholamine)、以及胰高血糖素等所抑制。
Insulin的信號通路是一個比較復(fù)雜的信號通路，主要是胰島素與屬于酪氨酸激酶的胰島素受體(Insulin receptor)結(jié)合，從而激活PI(3)K-Akt信號通路。Insulin的信號通路參見圖1。
胰島素的主要生物學功能是降低血糖，促進合成代謝。胰島素可以促進肝臟、肌肉、脂肪等器官和組織的葡萄糖攝入，抑制糖異生(gluconeogenesis)，促進糖原合成等。同時胰島素也可促進脂質(zhì)合成和儲存，抑制脂質(zhì)分解，促進蛋白合成并抑制蛋白降解，促進DNA和RNA合成，抑制自噬(autophagy)。胰島素分泌不足或胰島素敏感性下降，導致不能有效降低血糖，是糖尿病發(fā)生的主要原因。胰島素分泌過量時，會導致低血糖，甚至出現(xiàn)驚厥、昏迷和休克。
采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當加入辣根過氧化物酶標記靶蛋白抗體后，辣根過氧化物酶標記靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
保存條件：
除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB對人體有刺激性，請注意適當防護。
如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍色，應(yīng)該停止使用。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致zui終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
其他相關(guān)產(chǎn)品如下：
人胃癌高轉(zhuǎn)移細胞 MKN-28 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人胃癌細胞 MKN-45 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 圓形
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞 MuM-2B RPMI-1640+10% FBS 貼壁 多角形
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞 MuM-2C RPMI-1640+10% FBS 貼壁 多角形
人黑色素瘤細胞 MV3 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人乳腺癌細胞 MX-1 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
大鼠骨髓瘤細胞 Y3-Ag 1.2.3 DMEM+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
人肺腺癌細胞 NCI-H1975 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人大細胞肺癌細胞 NCI-H460 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人大細胞肺癌細胞 NCI-H661 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠髓性白血病淋巴細胞/小鼠白血病G-CSF依賴性細胞 M-NFS-60 RPMI-1640 +0.05 mM 2-mercaptoethanol +62 ng/mL rhM-CSF +10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
人大腸癌細胞 PA319 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人胰腺癌細胞 PATU8988 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人前列腺癌細胞 PC-3M RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人XG惡性膠質(zhì)瘤細胞 SF-295 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人胸膜瘤細胞 SMC-1 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人結(jié)腸腺癌細胞 SW1116 L-15 +10% FBS(不需CO2) 貼壁 上皮細胞樣
人食管癌細胞 TE-13 DMEM +10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞 TG-905 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人血管內(nèi)皮細胞 VE RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人胚腎細胞（EBNA1基因修飾） 293E IMDM +10% FBS 貼壁 上皮細胞樣，多角
人胚腎細胞（SV40T和EBNA1基因修飾細胞） 293ET IMDM +10% FBS 貼壁 上皮細胞樣，多角
人胚腎細胞 293FT DMEM+10% FBS 懸浮 圓形
人胚腎細胞 2V6.11 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人T淋巴細胞白血病細胞 A3 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
大鼠胸大動脈平滑肌細胞 A7r5 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人急性單核細胞白血病單核細胞 AML-193 IMDM+0.005mg/mL Insulin+0.005 mg/mL Transferrin+5ng/mL GM-CSF+5% FBS 懸浮 淋巴母細胞
小鼠黑色素瘤細胞 B16-F1 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠皮膚黑色素瘤細胞 B16-F10 DMEM+10% FBS 貼壁 梭形混上皮細胞樣
小鼠腦瘤細胞 BC3H1 DMEM+20% FBS 貼壁 多角形
人肝癌細胞 BEL-7405 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠胰島素瘤胰島β細胞 Beta-TC-6 DMEM+15% heat-inactivated FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠肝上皮細胞 BNL 1ME A.7R.1 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人乳腺癌細胞 BT-20 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠胚胎成纖維細胞 C3H/10T1/2, Clone 8 MEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人腎透明細胞癌細胞 Caki-2 McCoy's 5A+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人肺退行性癌細胞 Calu-6 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人急性淋巴細胞白血病細胞 CEM/C1 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
人張氏肝細胞 Chang liver RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細胞 Detroit 562 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠T細胞 CTLL-2 RPMI-1640+10% FBS+100U/mL rmIL-2 懸浮 淋巴母細胞
人巨核細胞白血病細胞 Dami RPMI-1640+10% FBS 懸浮 巨核細胞
小鼠T淋巴瘤細胞 E.G7-OVA RPMI-1640+0.05 mM 2-mercaptoethanol+0.4 mg/mL G418+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
人Burkitt淋巴瘤細胞 EB-3 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
牛胚氣管細胞 EBTr (NBL-4) MEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人胚胎腎細胞（Asp-2基因修飾） FC33 DMEM+250μg/mL G418+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣，多角
小鼠骨髓瘤細胞 FO DMEM+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞 G1 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人腎癌Wilms細胞 G-401 McCoy's 5A+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
大鼠垂體瘤細胞 GH3 F-12K+15% horse serum+2.5% FBS 疏松貼壁，有漂浮的細胞簇 上皮細胞樣
小鼠肝癌細胞 H22 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
大鼠肝癌細胞 H4-II-E-C3 DMEM+20% horse serum+5% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人羊膜細胞 HA RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠雜交瘤細胞(抗CD2) OKT 11 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細胞
人肝癌細胞 HB611 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人支氣管上皮樣細胞 HBE RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人乳腺導管癌細胞 HCC38 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人盲腸腺癌細胞（未分化） Hce-8693 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人宮頸癌細胞 HeLa 299 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人宮頸癌細胞 HeLa S3 F-12K+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人肝癌細胞 Hep B1.2 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人包皮成纖維細胞 HFF-1 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞 hFOB 1.19 DMEM:F12+0.3 mg/mL G418+10% FBS 貼壁 多細胞形態(tài)
人胚胎眼鞏膜成纖維細胞 HFSF DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人胎兒胸腺細胞株 HFT-8810 DMEM+10% FBS 貼壁
人牙齦成纖維細胞 HGF-1 DMEM+20% FBS 貼壁 成纖維細胞
人肝癌細胞 HHCC DMEM+10% FBS 貼壁 上皮樣；多角形；成堆生長
人肝癌細胞 HKC DMEM/F12+5% FBS 貼壁 多角
人肺細胞 HLF-a MEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人骨肉瘤細胞 HOS MEM+10% FBS 貼壁 上皮樣細胞和成纖維樣細胞均有
人胰腺腺泡上皮癌 HPAC F12+0.002mg/ml INS+0.005mg/ml transferrin+40ng/ml hydrocortisone+10ng/ml EGF+5% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人腦膠質(zhì)瘤細胞 HS 683 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
人T淋巴細胞白血病細胞 HuT 78 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細胞
人十二脂腸腺癌 HuTu-80 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
大鼠肝細胞 IAR20 MEM+20% FBS 貼壁 圓形、多角
人外周血B淋巴細胞 IM-9 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
大鼠胰島細胞瘤細胞 INS-1 RPMI-1640+10% FBS+50 μmol/ 貼壁 不規(guī)則，多角
大鼠骨髓瘤細胞 IR983F RPMI-1640+10% FBS 懸浮 圓形
小鼠單核巨噬細胞 J774A.1 DMEM+10% FBS 貼壁 單核細胞/巨噬細胞樣
小鼠骨肉瘤成骨細胞 K7M2 wt DMEM+10% FBS 貼壁 成骨細胞
人胃癌細胞 KATO III IMDM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人胚腎上皮細胞 KiMA MEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤細胞(腦轉(zhuǎn)移) KP-N-NS RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
小鼠皮下結(jié)締組織細胞 L Wnt-3A DMEM+0.4mg/mL G-418+10% FBS 貼壁 成纖維細胞
小鼠肺腺癌細胞 LA795 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
大鼠腹水癌細胞 LLC-WRC 256 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細胞
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 MC3T3-E1 Subclone 14 MEMα +10% FBS 貼壁 成纖維細胞樣
人乳腺癌細胞 MCF 7B DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細胞樣
人乳腺癌細胞 MDA-MB-157 L-15+10% FBS(不需CO2) 貼壁 上皮細胞樣
人乳腺導管癌細胞 MDA-MB-175VII L-15+10% FBS(不需CO2) 貼壁 上皮細胞樣
化工儀器網(wǎng)