豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒豬傳染性胃腸炎(TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起的一種急性、
高度接觸性傳染病。

豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒它主要引起 2 周齡以下仔豬幾乎 100%死亡，所以
及早確診對(duì)該病的防治具有特別重要的意義。豬傳染性胃腸炎病毒的傳統(tǒng)診斷
方法主要有病毒的分離鑒定、免疫熒光抗體試驗(yàn)、免疫電鏡觀察和 ELISA 等
方法。但這些方法操作過(guò)程繁瑣、操作難度大，所需要時(shí)間較長(zhǎng)，專(zhuān)一性不強(qiáng)
因此建立一種快速、高靈敏度的診斷方法對(duì)防治 TGEV 感染是十分必要的。
本就是針對(duì)這一需求開(kāi)發(fā)的實(shí)時(shí)定量 RT-PCR 產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 靈敏度高，分析靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/uL，遠(yuǎn)高于細(xì)菌培養(yǎng)法，也比
常規(guī)的 RT-PCR 檢測(cè)高 100 倍。
2. 特異性高，根據(jù) TGEV 的 N 基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，不會(huì)誤檢其他豬的病
原性病毒（如豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬圓環(huán)病毒、豬偽狂犬病
毒、豬細(xì)小病毒和豬瘟病毒等）。
3. 一管封閉式，避免了 RT-PCR 產(chǎn)物對(duì)后續(xù) RT-PCR 的污染。
4. 線(xiàn)性范圍廣，在 10-107拷貝/uL 的靶分子濃度范圍內(nèi)均呈線(xiàn)性。
5. 簡(jiǎn)單快捷，只需要 2 小時(shí)即可得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

規(guī)格及成分 成 份 50 次塑料袋包裝
即用型熒光 PCR Mix 750 uL
TGEV 專(zhuān)一性引物對(duì) 100 uL
TGEV 陽(yáng)性對(duì)照 50 uL
超純水 1 mL
使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 樣品。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 TGEV 樣品的 RNA，也可以另購(gòu)本公司的細(xì)菌 RNAout
或柱式細(xì)菌 RNAout，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、制備 TGEV 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 1,2,3,4,5 和 6 號(hào)。
2. 用帶芯分別加入 45 uL 超純水（zui用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 1 號(hào)管中加入 5 uL TGEV 陽(yáng)性對(duì)照(本試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘。
4. 換槍頭，從 1 號(hào)管中取 5 uL 溶液到 2 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘。
5. 換槍頭，從 2 號(hào)管中取 5 uL 溶液到 3 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到
6 個(gè)稀釋度的樣品。
6. 從 6 個(gè)管中分別取 5 uL 進(jìn)行定量 RT-PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品zui重
復(fù) 3 次。
三、熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）
7. 在 PCR 管中加入下列成分（每個(gè)樣品zui重復(fù)三次，這里只列出一次）：
成 份 樣品
6 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（見(jiàn)制
備 TGEV 標(biāo)準(zhǔn)曲
線(xiàn)）
陰性對(duì)照
TGEV 專(zhuān)一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 5 uL 無(wú) 無(wú)
TGEV 陽(yáng)性對(duì)照（XXX 拷
貝/uL）
無(wú)
5 uL（每個(gè)管加一
個(gè)稀釋度的對(duì)照） 無(wú)
自備 1×ROX (見(jiàn)注) 2 uL 2 uL 2 uL
補(bǔ)超純水到 15 uL 15 uL 15 uL
即用型熒光 RT-PCR Mix 15 uL 15 uL 15 uL
注：僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照，其他熒光
PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、
RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
此處陰性對(duì)照用的是水，用戶(hù)也可以用其他 RNA 做陰性對(duì)照。
8. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行定量 RT-PCR，反應(yīng)參數(shù)如下：
過(guò)程 溫度 時(shí)間 其他
RT（逆轉(zhuǎn)錄） 42℃ 5 分鐘
預(yù)變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反應(yīng)
（40 個(gè)循環(huán)）
95℃ 5 s
60℃ 20 s
收集熒光數(shù)據(jù)，所
選擇波長(zhǎng)見(jiàn)注。
溶解曲線(xiàn)分析判斷產(chǎn)
物特異性
加熱到 95℃ 10 分鐘，然后降低到 55℃后，
按 0.5℃/10s 的升幅將溫度提高到 95℃，
其間記錄下熒光信號(hào)的變化。特異的 TGEV
PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物將在 84.5℃產(chǎn)生特異峰。
注：本產(chǎn)品所用熒光染料跟 RNA 結(jié)合時(shí)的zui大光吸收是 500 nm，zui大發(fā)射
波長(zhǎng)是 530 nm，不同 PCR 產(chǎn)物（DNA段）結(jié)合時(shí)zui大吸收波長(zhǎng)是 471 nm，
無(wú)發(fā)射。
四、數(shù)據(jù)處理
9. 以 TGEV 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
再用濃度的的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值反推出
樣品 RNA 的濃度。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 豬流行性腹瀉病毒 RT-PCR 試劑盒（CAT#：11-200）。

玉米T25 PCR檢測(cè)試劑盒 940    11-2270
玉米內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒 950    11-2280
粘附性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 960    11-2290
榛子PCR檢測(cè)試劑盒 970    11-2980
支原體污染PCR檢測(cè)試劑盒11-180302    11-2840
芝麻PCR檢測(cè)試劑盒 980    11-2850
植物源性成分PCR檢測(cè)試劑盒 990    11-2870
志賀菌ipaH 基因(610bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒    11-2880
志賀菌ipaH 基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?    11-2860
志賀氏菌PCR檢測(cè)試劑盒    11-2890
志賀氏菌熒光PCR檢測(cè)試劑盒    11-2900
質(zhì)型多角體病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2910
致病性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒    11-2270
中華鱘特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒    11-2280
豬、牛、羊布魯氏菌病PCR檢測(cè)試劑盒    11-2290
豬布氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒    11-2980
豬傳染性胃腸炎病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒     11-2840
    11-2850
豬丹毒桿菌PCR檢測(cè)試劑盒    11-2870
豬肺炎支原體PCR檢測(cè)試劑盒    11-2880
豬高致病性藍(lán)耳病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒    11-2860
豬弓形蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒    11-2890
豬藍(lán)耳病病毒（高致病性）PCR檢測(cè)試劑盒    11-2900
豬痢疾密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒     11-2910
豬鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒（定做）      11-2270
豬鏈球菌基因分型PCR檢測(cè)試劑盒    11-2280
豬流感病毒H1亞型RT-PCR檢測(cè)試劑盒     11-2290
豬流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2980
豬流感病毒甲型H1N1 RT-PCR檢測(cè)試劑盒      11-2840
豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒     11-2850
豬流行性腹瀉病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒    11-2870
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2880
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2860
豬腦心肌炎病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒    11-2890
豬牛絳蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒    11-2900
豬皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2910
豬水泡病毒(SVDV)RT-PCR檢測(cè)試劑盒    11-2270
豬特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒    11-2280
豬托克特諾病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2290
豬細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒     11-2980
豬乙型腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2840
豬圓環(huán)病毒PCR檢測(cè)試劑盒     11-2850
豬圓環(huán)病毒Ⅰ型PCR檢測(cè)試劑盒    11-2870
豬圓環(huán)病毒Ⅱ型PCR檢測(cè)試劑盒      11-2880
轉(zhuǎn)基因植物35S基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2860
轉(zhuǎn)基因植物Bt基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2890
轉(zhuǎn)基因植物cry1A基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2900
轉(zhuǎn)基因植物EPSPS基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2910
轉(zhuǎn)基因植物NOS基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2270
轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2280
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2290
轉(zhuǎn)基因植物PRSV基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2980
轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因PCR檢測(cè)試劑盒（熒光探針?lè)ǎ?    11-2840
轉(zhuǎn)基因植物TETR基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2850
3’RACE試劑盒     
5’RACE試劑盒    
AFLP試劑盒（EcoRI-MseI）    
Brown-Brenn革蘭法細(xì)菌染色試劑盒    
BCA法蛋白定量試劑盒    
BCIP/NBT顯色試劑盒    
Bencosme 改良Masson三色法特殊細(xì)胞染色試劑盒    
Bielschowsky改良法神經(jīng)組織染色試劑盒    
Bradford法蛋白定量試劑盒    
cDNA*鏈合成試劑盒    
DNA Shuffling試劑盒    
DNA5’末端標(biāo)記試劑盒    
DNA快速連接試劑盒    
DNA磷酸化試劑盒    
DNA嵌套缺失試劑盒