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凝膠遷移或電泳遷移率實驗 (electrophoretic mobility shift assay, EMSA)是一種體外研究DNA結合蛋白(轉錄因子)和其相關的DNA結合序列(靶標基因的啟動子序列)相互作用的技術,可用于定性和定量分析。
EMSA,知其所以然!
正如上方實驗示意圖所示, 蛋白質可以與核酸探針結合,電泳時這種復合物比無蛋白結合的探針在凝膠中泳動的速度慢,即表現(xiàn)為相對滯后。通過競爭性對照組,可以驗證實驗的特異性。
EMSA,難點與痛點
EMSA實驗是很多實驗新手的攔路虎,不僅實驗步驟繁瑣(凝膠電泳,轉膜,紫外交聯(lián),信號檢測),而且實驗與對照組較多(通常為5組,標記探針、標記探針+蛋白、標記探針+蛋白+未標記探針(特異競爭寡核苷酸)、標記探針+蛋白+未標記突變探針、標記探針+蛋白+抗體),經(jīng)過多次測試優(yōu)化才能獲得理想的實驗結果,綜合成本非常高。
突破EMSA,創(chuàng)新的新方法,Nature為您測試:
作為表觀遺傳學的專業(yè)解決方案供應商,艾美捷科技為您推薦,Epigentek品牌創(chuàng)新推出的通用蛋白-DNA結合分析試劑盒(比色法):
產(chǎn)品名稱及描述 | 品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品說明 |
EpiQuik General Protein-DNA Binding Assay Kit | Epigentek | P-2004 | 詳情 |
* 客戶需自行準備如下材料:[1]生物素標記的特異性探針; [2]未標記的特異性探針;[3]目標蛋白的一抗與HRP-二抗
通用蛋白質-DNA結合分析試劑盒原理:
通用蛋白質-DNA結合分析試劑盒(比色),用于測量核提取物中轉錄因子與DNA結合活性。在實驗中,含有靶向轉錄因子的DNA結合共有序列的生物素標記的雙鏈寡核苷酸(寡核苷酸)與結合試驗緩沖液中的核提取物一起溫育。核提取物中活性形式的轉錄因子與其共有序列結合。然后將寡蛋白復合物捕獲到測定微孔上。靶蛋白可以通過高親和力抗體識別,并通過檢測抗體 - 顯色試劑反應系統(tǒng)進行比色測量。
產(chǎn)品特點與優(yōu)勢:
Nature文章發(fā)表結果:
《Klengel, Torsten, et al. "Allele-specific FKBP5 DNA demethylation mediates gene–childhood trauma interactions." Nature neuroscience 16.1 (2013): 33.》
rs1360780基因的A/G等位基因與TBP的結合能力分析,A等位基因的親和力明顯高于G.
更多發(fā)表文章,歡迎了解:
Hekmat-Scafe DS et. al. (November 2016). Using yeast to determine the functional consequences of mutations in the human p53 tumor suppressor gene: An introductory course-based undergraduate research experience in molecular and cell biology.Biochem Mol Biol Educ.
Jang JY et. al. (February 2016). Targeting adenine nucleotide translocase-2 (ANT2) to overcome resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor in non-small cell lung cancer. Mol Cancer Ther.
Koh J et. al. (October 2015). EML4-ALK enhances programmed cell death-ligand 1 expression in pulmonary adenocarcinoma via hypoxia-inducible factor (HIF)-1α and STAT3 OncoImmunology.
Gao Y The Univer et. al. (June 2014). Up-regulation of Hepatic VLDLR via PPARα Is Required for the Triglyceride-Lowering Effect of Fenofibrate. J Lipid Res.
* 通用蛋白質-DNA結合分析試劑盒說明書:點擊下載
Epigentek作為表觀遺傳學的專業(yè)解決方案供應商,在范圍具有的影響力,其推出的產(chǎn)品能夠有效幫助研究者快速獲得理想結果,不僅性價比,而且被大量文獻引用,讓您*后顧之憂!
Epigentek集團公司是創(chuàng)新技術和表觀遺傳學相關研究產(chǎn)品的開發(fā)商和供應商。公司開發(fā)了包括400多個磚利產(chǎn)品的全面的產(chǎn)品組合,為表觀遺傳學方面的研究和新藥研發(fā)提供全面系統(tǒng)的解決方案。作為Epigentek集團中國區(qū)域的總代理,艾美捷將其引入中國,作為其中國區(qū)域代理,將為客戶提供完整的表觀遺傳解決方案,產(chǎn)品包括表觀遺傳研究用分析試劑盒、抗體以及相關的抑制劑/拮抗劑等產(chǎn)品。
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