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U-ProteinExpress蛋白純化原則
蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個階段。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如DNA、RNA等分開，由于此時樣本體積大、成分雜，要求所用的樹脂高容量、高流速、顆粒大、粒徑分布寬．并可以迅速將蛋白與污染物分開，必要時可加入相應的保護劑（例如蛋白酶抑制劑），防止目的蛋白被降解。精細純化階段則需要更高的分辨率，此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來，要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率，常用離子交換柱和疏水柱，應用時要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個因素。選擇性指樹脂與目的蛋白結(jié)合的特異性，柱效則是指各蛋白成分逐個從樹脂上集中洗脫的能力，洗脫峰越窄，柱效越好。僅有好的選擇性，洗脫峰太寬，蛋白照樣不能有效分離。
U-ProteinExpress重組抗體使制備人源化抗體和人源抗體成為可能，而這是其他常規(guī)的多克隆或單克隆抗體制備方法所不可能做到的。主要包括四個方面的技術：抗體庫技術，包括組合抗體庫、噬菌體抗體庫、細菌和酵母展示的抗體庫、核糖體展示的抗體庫及其抗體庫的篩選技術；重組抗體基因的改造和表達，包括抗體親和力成熟、抗體人源化改造和穩(wěn)定性改造，以及抗體基因在原核、酵母、昆蟲、哺乳動物細胞、植物及轉(zhuǎn)基因動物中的表達；重組抗體效應功能的提高，涉及抗體與同位素、藥物、毒素結(jié)合的"導向藥物"、雙特異性抗體、抗體一酶融合蛋白、免疫細胞因子及細胞內(nèi)抗體；抗體特異性分析和鑒定，主要介紹抗體的分離和純化、抗體標記技術、抗體親和力測定、抗體的抗原表位分析、抗體基因測序和結(jié)構(gòu)模建，以及常用的抗體鑒定技術，如ELISA、免疫組化、FACS分析、免疫沉淀和Westernblot等。
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