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小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，其特征為口腔、舌黏膜糜爛、流淚、流鼻涕。本病的易感動物為山羊，也可感染綿羊、白尾鹿等，但對牛無感染。世界衛(wèi)生組織將小反芻獸疫列為需要通報的動物傳染病，我國將其列為一類動 物傳染病，為國家免疫計劃書中強制免疫的疫病之一。

 

【原    理】

    本試劑盒系由預包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標板、抗體工作液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本小反芻獸疫病毒抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值， 即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。

 

 【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液，再加入10μl血清樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃反應30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，37℃避光反應15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。