紫外可見分光光度計是由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。光源的功能是提供足夠強(qiáng)度的、穩(wěn)定的連續(xù)光譜。
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
選擇紫外可見分光光度計的原因
光學(xué)構(gòu)造
一般來說，紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過一個斬光輪將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實際樣品?？梢宰钚』馄坪蜏p少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度，所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長情況。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。
一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
為了測量吸光值，分光光度計制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。PMTs提供快速的反應(yīng)時間和良好的靈敏度，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
樣品類型
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求。但盡管對于小實驗室來說，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機(jī)型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。
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