商品介紹:
PI4KIIIbeta-IN-10是一種有效的PI4KIIIβ抑制劑,IC50為3.6nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1881233-39-1 純度:98.21% 分子量:475.58 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
Prosapogenin CP6英文名稱: MagnesonII白介16抗體包裝1g
Raddeanoside 20英文名稱: Ferron抑制βB/Inhibin β B抗體包裝250mg
Sapindoside A英文名稱: 3-Methyl-2-benzothialinone白介11抗體包裝1g
Smyrindioloside英文名稱: Miglitol白介22受體抗體包裝5g
Thonningianin A英文名稱: Miglitol白介26抗體包裝1g
Tokinolide B英文名稱: 1-Naphtholphthalein白介-17D抗體包裝25g
Triptonine B英文名稱: Dapoxetine hydrochloride環(huán)指蛋白217抗體包裝5g
α-倒捻子(標準品)英文名稱: Dapoxetine hydrochloride白介2抗體(人)包裝1g
α-蒎烯英文名稱: Fast Black K Salt白介-23受體抗體包裝500mg
α-乳香英文名稱: Amido black 10B胰島樣生長因子結(jié)合蛋白3抗體包裝5g
α-石竹烯英文名稱: Naltrexone hydrochloride白介6受體β抗體IL-6Rβ包裝1g
α-細辛腦,細辛(標準品)英文名稱: Triphenylarsine oxide干擾-gamma受體1抗體包裝25g
α-香附(標準品)英文名稱: 5,7,4’-Trihydroxy-8-methylflavanone白介1α前肽/IL-1α前肽抗體包裝5g
α-常春藤皂苷(標準品)英文名稱: Aloin B整合α11抗體包裝1g
β,β-二基烯酰阿卡寧(標準品)英文名稱: Arctigenin 4'-O-β-gentiobioside胰島生長因子樣家族成員2抗體包裝5g
弗氏志賀菌Shigella│flexneri 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR利什曼原蟲試劑盒L-精;L(+)-Arginine
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,可用于培養(yǎng)利尿肽試劑盒積雪草;Asiatic acid
弧菌Vibrio│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP,BR李斯特菌抗體試劑盒金雀花堿;Cytisine
PI4KIIIβ抑制劑(PI4KIIIbeta-IN-10)熒光Cy5標記兔IgG(流式同型對照)蛤蚧(標準品)Human, Mouse
熒光APC標記兔IgG(流式同型對照)油(標準品)Human
鏈霉親和標記兔抗人IgG隔山消(標準品)Human, Mouse
PE標記鏈霉親和根皮苷(標準品)Human, Mouse
性磷標記鏈霉親和根皮(標準品)Human
辣根過氧化物標記鏈霉親和功勞木(標準品)Human, Mouse
金標記鏈霉親和(10nm/15nm)鉤藤(鉤藤)(標準品)Human
辣根過氧化物標記親合鉤藤(標準品)Human
辣根過氧化物標記兔抗HRP鉤吻(標準品)Human