以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
KCNK3小分子抑制劑(ML365) | ML365 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
ML365是一新型選擇性TASK1(KCNK3)小分子抑制劑,IC50值為4nM(thallium influx fluorescent assay)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):947914-18-3 純度:98.38% 分子量:360.41 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
α-胞襯蛋白(SPTAN1)ELISA Kit英文名稱:SPTAN1 ELISA Kit鈣連蛋白抗體包裝500g
α白蛋白(AFM)ELISA Kit英文名稱:AFM ELISA Kit二氫嘧啶相關(guān)蛋白2抗體包裝50mg
α2-纖溶抑制因子(α2PI)ELISA Kit英文名稱:α2PI ELISA Kit色P450ⅡE1抗體包裝1g
α2-巨球蛋白(α2M)ELISA Kit英文名稱:α2M ELISA Kit趨化因子受體1抗體包裝100g
α2-HS糖蛋白(αHSG)ELISA Kit英文名稱:αHSG ELISA Kit磷化原癌基因c-Raf抗體包裝25g
α1-微球蛋白(α1M)ELISA Kit英文名稱:α1M ELISA Kit磷化致癌基因C-Myc抗體包裝500g
α1-性糖蛋白(α1AGP)ELISA Kit英文名稱:α1AGP ELISA KitCD33抗體包裝1g
α1-抗(α1AT)ELISA Kit英文名稱:α1AT ELISA Kit磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
Zeste同源物增強(qiáng)子1(EZH1)ELISA Kit英文名稱:EZH1 ELISA Kit磷化原癌基因c-Jun抗體包裝1g
YY肽(PYY)ELISA Kit英文名稱:PYY ELISA Kit離子通道蛋白3抗體包裝25g
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)ELISA Kit英文名稱:XRCC6 ELISA Kit磷化周期E抗體包裝5g
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白5(XRCC5)ELISA Kit英文名稱:XRCC5 ELISA Kit磷化分裂周期蛋白25C抗體包裝250mg
X-框結(jié)合蛋白1(XBP1)ELISA Kit英文名稱:XBP1 ELISA Kit磷化周期依賴性激9抗體包裝1g
Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)ELISA Kit英文名稱:WFS1 ELISA Kit磷化Connexin 43蛋白抗體包裝5g
WNT1誘導(dǎo)信號(hào)通道蛋白1(WISP1)ELISA Kit英文名稱:WISP1 ELISA Kit絲切蛋白抗體包裝100g
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度98%以上異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G試劑盒乙酰纈草三酯;Acevaltratum
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E試劑盒乙酰哈巴苷;8-O-Acetylharp
: =CGMCC1.5361=JCM14000資源名稱: 黃微球菌 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D試劑盒異型南五味子丁;Heterocliti
KCNK3小分子抑制劑(ML365)脫氫復(fù)合物X蛋白抗體馬來氟伏沙明 Metamorphosin A
磷烯羧激抗體馬來那敏/撲爾敏 Neo-Kyotorphin
果糖-2,6-二磷1抗體馬來溴那敏 Neurokinin A (4-10)
磷化6磷果糖激抗體嗎貝 Neuropeptide W-30 (human)
p21蛋白抗體美芬諾 Neuropeptide W-30 (rat)
P選擇糖蛋白配體1抗體美索巴莫 Neurotensin (1-8)
絲蛋白2抗體孟魯司特鈉 Neuropeptide Y (13-36)(porcine)
蛋白調(diào)解因子10抗體米爾貝肟 Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)
香葉烯轉(zhuǎn)移1β抗體米拉貝 Neuropeptide Y (22-36)