商品介紹:
GSK583是一種高效,高選擇性的RIP2Kinase抑制劑,其IC50值為5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1346547-00-9 純度:98.07% 分子量:398.45 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
1-羥基-3,4,5-三氧山(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ammonium acetate雌激誘導(dǎo)基因121蛋白抗體包裝100g
10-姜酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cellulose, Microcrystalline內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體包裝25g
10-羥基癸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: alpha-Lactose, monohydrate骨架連接質(zhì)膜蛋白抗體包裝500g
10-羥基癸烯,10-HDA(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Calcium chloride, dihydrate吞噬運(yùn)動(dòng)蛋白1抗體包裝100g
10-羥基喜樹堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethylene glycol酪蛋白激受體A10抗體包裝25g
10-脫乙酰巴卡亭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Magnesium sulfate, heptahydrate腸道病71型/手足口病病抗體包裝5g
11(α)氧基柴胡皂苷F英文名稱: Glucozyme轉(zhuǎn)錄因子ELF1抗體包裝100g
11-O-羅漢果苷V(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PEG 4000酪蛋白激B3抗體包裝25g
11-O-異丁?;?12-O-乙?;P(guān)藤甘元B-3-...英文名稱: Potassium phosphate, dibasic, anhydrous磷化酪蛋白激受體B1+B2抗體包裝500g
11-羥基柳杉酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formamide酪蛋白激受體B1+B2+B3+B4抗體包裝10g
11-羰基-β-乙酰乳香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PEG 8000空通氣孔樣蛋白2抗體包裝50g
12-Epinapelline英文名稱: Lithium chloride同源盒蛋白轉(zhuǎn)錄因子EN2抗體包裝100g
12-O-Tiglylphorbol-13 –isob...英文名稱: Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激5抗體包裝25g
13-氧-(9E,11E)-十八碳二烯英文名稱: TTC,TTZ,Tetrazolium RedCD39樣蛋白1抗體包裝5g
14α-羥基Sprengerinin C英文名稱: Sulfamethoxypyridazine真核翻譯起始因子5抗體包裝25g
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BR級(jí),可用于培養(yǎng),純度99%以上,三合物,USP30肽聚糖識(shí)別蛋白L試劑盒蛇床子;Osthole
白色產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│albochromogenes 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定肽聚糖試劑盒升麻;Cimifugin
新月彎孢Curvularia│lunata 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6.0肽基脯酰順反異構(gòu)試劑盒圣草次苷;Eriocitrin
RIP2Kinase抑制劑(GSK583)鋅指蛋白206抗體10-去乙酰紫杉 DEACETYLTAXOL, 10-(P)Human, Mouse
緊密粘連蛋白ZO-3抗體10-去乙酰紫杉 DEACETYLTAXOL, 10-(P)Human
鋅指蛋白ZBT10抗體去乙酰毛花苷 C DEACETYLLANATOSIDE C(RG)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白BED抗體去乙酰毛花苷 C DEACETYLLANATOSIDE C(RG)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白217抗體DEBENZOYL-N-ISOPENTANOYLTAXOL, N-(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白575抗體DEBENZOYL-N-(S)-2-METHYLBUTANOYLTAXOL, N-(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白X染色體蛋白抗體DATISCOSIDE(RG)Human
抑制蛋白4抗體DATISCOSIDE(P)(PLEASE CALL)Human
透明帶黏附蛋白ZAN抗體DATISCIN(RG)Human, Mouse