以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
L755507是一個(gè)有效的,選擇性強(qiáng)的β3-AR激動(dòng)劑,其IC50值為35nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):159182-43-1 純度:98.0% 分子量:584.73 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
生長(zhǎng)分化因子11(GDF11)ELISA Kit英文名稱:GDF11 ELISA Kit胞苷尿苷鳥苷結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
生長(zhǎng)分化因子1(GDF1)ELISA Kit英文名稱:GDF1 ELISA Kit原腸胚雙向形成相關(guān)蛋白抗體包裝5g
滲透性糖蛋白(Pgp)ELISA Kit英文名稱:Pgp ELISA Kit分裂周期蛋白CDC123抗體包裝100g
腎足蛋白(NPHN)ELISA Kit英文名稱:NPHN ELISA Kit神經(jīng)蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體包裝25g
腎臟腦蛋白(KIBRA)ELISA Kit英文名稱:KIBRA ELISA Kit趨化樣因子超家族成員3抗體包裝100ml
腎損傷分子1(Kim1)ELISA Kit英文名稱:Kim1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白1B抗體包裝25ml
腎(REN)ELISA Kit英文名稱:REN ELISA Kit冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白抗體包裝5ml
腎上腺能受體β3(ADRβ3)ELISA Kit英文名稱:ADRβ3 ELISA Kit連接相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
腎上腺能受體β2(ADRβ2)ELISA Kit英文名稱:ADRβ2 ELISA Kit連接相關(guān)蛋白2抗體包裝5g
腎上腺能受體β1(ADRβ1)ELISA Kit英文名稱:ADRβ1 ELISA Kit磷化周期依賴性激5抗體包裝250mg
腎上腺能受體α1A(ADRα1A)ELISA Kit英文名稱:ADRα1A ELISA Kit異戊烯半胱羧基轉(zhuǎn)移抗體包裝1g
神經(jīng)源3(NEUROG3)ELISA Kit英文名稱:NEUROG3 ELISA Kit鳥嘌呤核苷交換因子CLLD7抗體包裝5g
神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)ELISA Kit英文名稱:NPTX1 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員4抗體包裝25g
神經(jīng)元特異性烯化(NSE)ELISA Kit英文名稱:NSE ELISA Kit趨化樣因子超家族成員7抗體包裝5g
神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT4)ELISA Kit英文名稱:NT4 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員5抗體包裝5g
蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質(zhì)量規(guī)格:純度98%轉(zhuǎn)錄因子E2F1 ELISA Kit紫莖女貞苷B;Ligupurpurosi
玫瑰色庫克菌Kocuria│roseus 質(zhì)量規(guī)格:純度大于98%,USPgrade轉(zhuǎn)錄因子AP-1 ELISA Kit紫莖女貞苷A ;Ligupurpuros
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定,HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3試劑盒左旋肉堿; L(-)-Carnitine
β3-AR激動(dòng)劑(L755507)糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體葫蘆 B CUCURBITACIN B(P)Human, Mouse
母瘤蛋白抗體葫蘆 B CUCURBITACIN B(P)Human, Mouse
信號(hào)通路Wnt16抗體葫蘆 I CUCURBITACIN I(AS)Human
WDR23蛋白抗體葫蘆 I CUCURBITACIN I(AS)Human, Mouse
端粒卡哈爾體蛋白抗體葫蘆 D CUCURBITACIN D(AS)Human
信號(hào)通路WNT10B抗體葫蘆 E CUCURBITACIN E(P)Human, Mouse, Rat
EBV核蛋白2抗體葫蘆 E CUCURBITACIN E(P)Human
Wnt信號(hào)受體蛋白抗體蓽澄茄 CUBEBIN(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse
富含脯同源蛋白1抗體隱黃質(zhì) CRYPTOXANTHIN, B-(RG)Human, Mouse, Rat