以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
HJC0152hydrochloride是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)的抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1420290-99-8 分子量:406.65 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
肽聚糖識(shí)別蛋白1(PGLYRP1)ELISA Kit英文名稱:PGLYRP1 ELISA Kit碳酐11抗體包裝5g
胎盤鈣黏蛋白(CDHP)ELISA Kit英文名稱:CDHP ELISA Kitα酪蛋白抗體包裝100g
羧肽N1(CPN1)ELISA Kit英文名稱:CPN1 ELISA Kit周期調(diào)控相關(guān)蛋白1包裝25g
羧肽A3(CPA3)ELISA Kit英文名稱:CPA3 ELISA Kit間粘附分子1抗體包裝5g
羧基賴(CML)ELISA Kit英文名稱:CML ELISA KitCD105抗體包裝25g
髓樣前體細(xì)胞抑制因子2(MPIF2)ELISA Kit英文名稱:MPIF2 ELISA Kit軸突蛋白5抗體包裝5g
髓細(xì)胞觸發(fā)受體2(TREM2)ELISA Kit英文名稱:TREM2 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子COUP1抗體包裝1g
髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(TREM1)ELISA Kit英文名稱:TREM1 ELISA Kit表皮生長因子樣蛋白1抗體包裝5g
髓分化因子88(MyD88)ELISA Kit英文名稱:MyD88 ELISA Kit癌胚抗原相關(guān)粘附分子1抗體包裝1g
性磷1(ACP1)ELISA Kit英文名稱:ACP1 ELISA Kit19號(hào)染色體開放閱讀框75抗體包裝5g
性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF1)ELISA Kit英文名稱:FGF1 ELISA Kit隱花色蛋白1抗體包裝1g
速激肽受體2(TACR2)ELISA Kit英文名稱:TACR2 ELISA Kit隱花色蛋白2抗體包裝5g
速激肽受體1(TACR1)ELISA Kit英文名稱:TACR1 ELISA Kit鈣通道L型α2多肽抗體包裝25g
松弛肽(RLN)ELISA Kit英文名稱:RLN ELISA KitL型電壓依賴型鈣通道β3(L-type Ca++ CPβ3)抗體包裝5g
四旋蛋白30(TSPAN30)ELISA Kit英文名稱:TSPAN30 ELISA KitL型電壓依賴型鈣通道β4抗體包裝500g
局限青霉Penicillium│restrictum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR總蛋白S試劑盒棕矢車菊;Jaceosidin
葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格:純度> 99%,BR,可用于培養(yǎng)總蛋白C試劑盒紫蘇;Perillyl Alcohol
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品自然抗性相關(guān)巨噬蛋白2試劑盒竹紅菌乙;Hypocrellin B
STAT3抑制劑(HJC0152 hydrochloride)糖代謝相關(guān)蛋白1抗體山麥冬皂苷B 1,10-Phenanthroline-5,6-dione
G蛋白偶聯(lián)受體64抗體山麥冬皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品) TPP (=Tetraphenylporphyrin)
γ丁受體相關(guān)蛋白樣1抗體山麥冬皂苷J(rèn) TCPP [=Tetrakis(4-carboxyphenyl)porphyrin]
法尼二磷合1抗體酚(標(biāo)準(zhǔn)品) Azomethine H
鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白1抗體酚-3-O-β-D-槐糖苷;酚-3-O-槐糖苷 N-Methylfurohydroxamic Acid
膠質(zhì)纖維性蛋白GFAPδ抗體酚-4’-O-葡萄糖苷;酚-4’-O-β-D-... 2,2'-Bicinchoninic Acid Dipotassium Salt Hydrate
β半乳糖苷抗體酚-7-O-葡萄糖苷 Chloranilic Acid
巨軸索蛋白GAN抗體苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Pyrogallol Red
G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞A2抗體(標(biāo)準(zhǔn)品) Zincon