以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Auranofin(SKF-39162)是硫氧還蛋白還原酶(TrxR)抑制劑,IC50值為0.2μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):34031-32-8 別名:SKF-39162 純度:98.0% 分子量:680.5 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
山柰酚-3-O-蕓香糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mulberroside A磷化肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體包裝5g
山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷英文名稱: Morin磷化肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體包裝100g
山香圓葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Complanatoside A磷化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體包裝25g
山藥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Shanzhiside methylester磷化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激抗體包裝1g
山銀花(灰氈毛忍冬)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Esculentoside A磷化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激抗體包裝250mg
山楂(山里紅)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Alibiflorin磷化造血祖激抗體包裝5g
山楂(山楂)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ostholep38調(diào)節(jié)/激活蛋白激抗體包裝1g
山楂,馬斯里(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Osthole肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體包裝25g
山楂葉(山里紅)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Muscone磷化絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體包裝5g
山芝麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cimigenol-3-O-β-D-xylpyranoside磷化蛋白激C底物Marcks抗體包裝25ml
山梔苷酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cimifugin髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體包裝100g
山茱萸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Prim-O-glucosylcimifugin巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體包裝1g
山茱萸新苷I英文名稱: Cimigenol-3-O-α-L-arabinoside有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白樣2抗體包裝25g
珊瑚菜內(nèi)酯,珊瑚菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Eriocitrin微原纖維膠原相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
珊瑚姜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Eriodictyol減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體包裝25g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:含量98%,化學(xué)純抗Sc1-70抗體試劑盒大黃;Rhein
云南紅球菌Rhodococcus│yunnanensis 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR,生化試劑級(jí)抗Sa抗體試劑盒地膚子皂苷Ic;Momordin Ic
小單孢菌Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品抗Mi2抗體試劑盒丹參IIA;Tanshinone II
TrxR抑制劑(Auranofin)質(zhì)金屬蛋白2抗體山茶甙A Pseudoginsenoside RT5
質(zhì)金屬蛋白3抗體山茶甙B Allantoin
質(zhì)金屬蛋白-7抗體山茶苷A Limonin
質(zhì)金屬蛋白-9抗體山豆根(標(biāo)準(zhǔn)品) Limonin
髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白抗體山風(fēng)(標(biāo)準(zhǔn)品) Limonin
多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體山姜(標(biāo)準(zhǔn)品) Stearic acid
多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體山橿根(標(biāo)準(zhǔn)品) Stearic acid
多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體山臘梅葉(標(biāo)準(zhǔn)品) Arctigenin
線粒體核糖體蛋白L28抗體山蠟梅 Arctiin