以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Revizinone是一個(gè)新的有選擇性的phosphodiesterase(PDE)III抑制劑,在酶檢測實(shí)驗(yàn)上的IC50值是0.036microM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):133718-29-3 別名:R80122 純度:98.10% 分子量:459.54 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
D-半乳糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TeniposideB和T淋巴衰減蛋白抗體包裝5g
D-(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TeniposideCD4抗體包裝150
D-甘露糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tenofovir disoproxil fumarateCD44抗體包裝2050
D-核糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tenofovir/Tenofovir disoproxil fumarate白共同抗原抗體包裝580
D-環(huán)絲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TenoxicamCD5抗體包裝5g
D-焦谷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Terbinafine 間粘附分子-1抗體包裝25g
D-木糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Terbinafine 神經(jīng)粘附分子1抗體包裝5g
D-絲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Terbinafine HClL選擇抗體包裝25g
Deoxycorticosterone acetate...英文名稱: Terbinafine HClCD68抗體包裝5g
Dexamethasone Acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Teriparatide acetate/Human PTH(1-34)6號(hào)染色體開放閱讀框226抗體包裝100g
Dexamethasone Sodium Phosph...英文名稱: Terlipressin Acetate間隙連接蛋白30抗體包裝25g
Dexamethasone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Thiamphenicol2號(hào)染色體開放閱讀框69抗體包裝25g
Diethylstilbestrol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Thiamphenicol3號(hào)染色體開放閱讀框18抗體包裝5g
DL-精(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Thymopentin Acetate巨噬炎癥因子1β /MIP-1β抗體包裝1g
Donepezil HCl type III(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tiagabine HCl外基質(zhì)金屬蛋白誘導(dǎo)因子抗體包裝5g
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)血吸蟲試劑盒熊果乙酯;Acetylursolic
威尼斯不動(dòng)桿菌Acinetobacter│venetianus 質(zhì)量規(guī)格:≥675 U/mg,USP28血栓B2試劑盒細(xì)辛;2,4,5-Trimethoxy
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:含量測定血栓A2合成試劑盒香葉;Geraniol
PDE III抑制劑(Revizinone)細(xì)菌RNA提取試劑小駁骨(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
RNAin(非凍型RNA樣品保存液)小檗紅(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
總RNA提取試劑小檗(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
液體樣品RNA提取試劑小檗皮(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
RNA高效保存液小豆蔻明(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
植物RNA提取的試劑小茴香(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
RNAon(即用型RNA變性上樣液)小薊(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
RNAsharp(RNA電泳帶銳化劑)小秦艽(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
蛋白抽提試劑盒-I (實(shí)體組織和蛋白抽提)小葉榕(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse