商品介紹:
IWP L6是高活性Porcn抑制劑,EC50為0.5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1427782-89-5 純度:98.0% 分子量:472.58 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Porcn抑制劑(IWP L6) | IWP L6 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)ELISA試劑盒 ,英文名: TGFβ1 ELISA Kit
犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineProgesterone,PROGELISAkit 96T/48T
犬A(VA)免疫試劑盒 Dog Vitamin A,VA ELISA Kit
英文名稱(chēng)HumanGlycoprotein96ELISAKit人腫瘤排斥性抗原gp96(gp96)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒50次
RatGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISA試劑盒大鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-1β ELISA Kit
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA檢測(cè)試劑盒RatVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKit 96T/48T
人STEAP家族成員4(Steap4)免疫試劑盒 Human Steap4 ELISA Kit
英文名稱(chēng)MousePSAELISAKit小鼠前列腺特異性抗原(PSA)規(guī)格:96T/48T
TUBULIN(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
RabbitOncostatin-M,OSMELISA試劑盒兔抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬生長(zhǎng)激素(GH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human kallikrein 10 (KLK 10) ELISA Kit 人激肽釋放酶10(KLK 10)ELISA試劑盒
GuineapigovalbuminspecificIgG,OVAsIgGELISAKit 豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVAsIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforANG-1ELISAKit大鼠血管生成素1規(guī)格:48T/96T
血液二胺氧化酶(DAO)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次
Porcineendothelin1,ET-1ELISAKit豬內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Porcn抑制劑(IWP L6)SOX14 英文名稱(chēng): 核轉(zhuǎn)錄因子SOX14抗體 0.2ml
FCGR1A 英文名稱(chēng): 免疫球蛋白G Fc段受體I 0.1ml
外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體 Anti-Myelin P0 protein 0.2ml
Anti-Sema7A/CD108/FITC 熒光素標(biāo)記軸突生長(zhǎng)因子CD108抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PARK2(Ser101) 磷酸化帕金蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
14-3-3 protein 14-3-3 蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg