以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Balapiravir(R1626,Ro4588161)是R1479(RG1479)的原藥,是HCV的RNA聚合酶核苷類似物抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):690270-29-2 別名:Ro 4588161;R1626 純度:98.11% 分子量:494.5 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
關(guān)黃柏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl orange10抗體包裝5g
管花苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl Red sodium salt11輕鏈抗體包裝100ml
貫葉金絲桃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl Red sodium salt12重鏈抗體包裝25ml
光甘草定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: m-Methyl redFIGNL1蛋白抗體包裝25g
廣東紫株(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MurexideFAM70A蛋白抗體包裝5g
廣防已(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Murexide含纖維蛋白原C結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝1g
廣藿香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: methyl violetF-box蛋白相關(guān)蛋白6抗體包裝5g
廣藿香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nitrazine yellow磷化成纖維生長(zhǎng)因子受體底物2抗體包裝1g
廣金錢草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neutral red椎骨蛋白2抗體包裝25g
廣山楂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Orange ⅣVII包裝5g
廣山楂葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: OrangeⅠ10抗體包裝1g
廣天仙子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Patent Blue VF脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF2抗體包裝100mg
廣棗(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phenolphthalein肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FGGY抗體包裝500mg
龜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Potassium iodide solution肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FIG4抗體包裝100ml
鬼臼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Potassium iodide solution黃腺嘌呤二核苷抗體包裝500ml
乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀瘤病16型試劑盒去氫木香內(nèi)酯;Dehydrocostus
短小芽孢桿菌Bacillus│pumilus 質(zhì)量規(guī)格:>98%乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白試劑盒千金子二萜;Lathyrol
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白試劑盒秦皮;Esculin
RNA聚合酶核苷類似物抑制劑(Balapiravir)血紅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體紫草呋喃A Human recombinant Insulin
血紅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體紫草苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Human Insulin
造血信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抗體紫草茸(標(biāo)準(zhǔn)品) Sertaconazole nitrate
鹵脫鹵樣水解域內(nèi)含蛋白1A抗體紫草,左旋紫草(標(biāo)準(zhǔn)品) Elcatonin Acetate
E3連接抑制受體抗體紫草(標(biāo)準(zhǔn)品) Enfuvirtide Acetate
His 結(jié)構(gòu)域內(nèi)含酪磷蛋白抗體紫丁香酚苷(標(biāo)準(zhǔn)品) D-(+)-Trehalose Anhydrous
多聚腺苷因子Clp1蛋白抗體紫河車(標(biāo)準(zhǔn)品) Gonadorelin Acetate
心肌肌球蛋白重鏈抗體紫花地?。?biāo)準(zhǔn)品) Goserelin Acetate
HECT E3泛鏈接抗體紫花杜鵑(標(biāo)準(zhǔn)品) Leuprolide Acetate