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實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有人做腫瘤細(xì)胞爬片，我連見(jiàn)都沒(méi)見(jiàn)過(guò)，老板的實(shí)驗(yàn)卻要求這個(gè)東西，只能自己摸索。查資料 搜信息，自己實(shí)踐，終于做出了可以用來(lái)后期實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞爬片。

總結(jié)經(jīng)驗(yàn)如下：

首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過(guò)夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。

爬片可以在培養(yǎng)皿 六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(fèi)(培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用)二來(lái)覺(jué)得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時(shí)記得消兩把鑷子。

具體操作是：用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液(注意：這一點(diǎn)很重要，關(guān)系到將來(lái)爬出來(lái)片子的質(zhì)量)。

取出消毒的培養(yǎng)皿，可以先加少量培養(yǎng)基(以使玻片與培養(yǎng)皿緊密接觸)，將玻片小心放入擺放其中，然后將單細(xì)胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。zui后蓋上培養(yǎng)皿置于37度5%CO2的暖箱中培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間適時(shí)取出爬片。

爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒鐘，然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘，然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。腫瘤細(xì)胞同時(shí)操作過(guò)程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。

將做好的爬片置于濾紙上晾干，然后用中性樹(shù)膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹(shù)膠*干了之后才能做后續(xù)實(shí)驗(yàn)，要不然玻片會(huì)掉下來(lái)的，就又是前功盡棄了 做好的細(xì)胞爬片可以放在-20保存?zhèn)溆?，具體能保存多長(zhǎng)時(shí)間不太清楚，當(dāng)然盡量早用。
戊五醇;五羥基戊烷;1,2,3,4,5-五羥基戊烷    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    木糖醇    20mg/支    英文名稱    Xylitol    規(guī)格:
    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    鹽酸育亨賓    20mg/支    英文名稱    Yohimbine Hydrochloride    規(guī)格:
尼古丁    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    煙堿    20mg/支    英文名稱    L-Nicotine    規(guī)格:
野靛堿    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    金雀花堿    20mg/支    英文名稱    Cytisine    規(guī)格:
秋水仙素    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    秋水仙堿    20mg/支    英文名稱    Colchicine    規(guī)格:
薯蕷皂素;地奧配質(zhì)    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    薯蕷皂苷元    20mg/支    英文名稱    Diosgenin    規(guī)格:
薯蕷皂甙; 重樓皂苷III; 重樓皂甙III    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    薯蕷皂苷    20mg/支    英文名稱    Dioscin    規(guī)格:
原薯蕷皂甙    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    原薯蕷皂苷    20mg/支    英文名稱    Protodioscin    規(guī)格:
腫瘤細(xì)胞