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更新時(shí)間:2024-03-11 13:34:54
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Proteinase K,也稱protease K或endopeptidase K,中文名為蛋白酶K,可以用于消化各種蛋白。用于各種常見的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)實(shí)驗(yàn),例如基因組DNA抽提、酶的消化去除等。
本蛋白酶K不含DNase,不含RNase,無(wú)核酸殘留。
本蛋白酶K酶活力≥30U/mg,純度≥95% (電泳)。在pH7.5、37℃,以血紅蛋白為底物,1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當(dāng)于1微摩爾LAO氨酸Folin陽(yáng)性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量,定義為一個(gè)單位蛋白酶K酶活力。
本蛋白酶K在很寬的pH范圍內(nèi)有效,有效的pH范圍為pH4.0-12.5,最佳pH范圍為pH7.5-8.0。
蛋白酶K的最佳反應(yīng)溫度為65℃,但在65℃或更高溫度時(shí),蛋白酶K自身也會(huì)非常迅速地降解。很多時(shí)候反應(yīng)溫度選擇50-55℃。
在0.2-1% SDS或約10mM尿素存在的情況下,蛋白酶K顯示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作濃度為0.05-1mg/ml,根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。
常用濃度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、鹽酸胍對(duì)蛋白酶K的活力影響不大。
由于蛋白酶K屬于一種廣譜SI氨酸蛋白酶,所以可被某些SI氨酸蛋白酶的抑制劑如PMSF、AEBSF等所抑制。
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