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詳細介紹
產(chǎn)品屬性：
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 293 [HEK-293] (人胚腎細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0001 |
商品介紹：
名稱 293 [HEK-293] (人胚腎細胞) 別稱 Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293 種屬 人類 年齡（性別） 胎兒 組織來源 胚胎腎；以腺 病毒5DNA進行轉(zhuǎn)化 生長特性 貼壁細胞 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 背景描述 293 [HEK-293]細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細胞形成的永生化細胞，293 [HEK-293]細胞包含并表達轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報道中指出，293 [HEK-293]細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主，可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。 生物安全等級 2 生長培養(yǎng)基 MEM（ATCC改良)＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例 1:3-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 倍增時間 ~24-30小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO?，5%溫度：37℃ 致瘤性 Yes, forms tumors in nude mice. 受體表達情況 vitronectin 注意事項 該細胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細胞團，為正?，F(xiàn)象，請按照收貨注意事項處理。 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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抗Beta Actin兔多克隆抗體（可提供標記服務）
抗GAPDH鼠單克隆抗體（可提供標記服務）
抗GAPDH兔多克隆抗體（可提供標記服務）
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