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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-06 16:33:54瀏覽次數(shù)：327
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0351 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| hFOB 1.19 (SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0351 |
商品介紹：
名稱 hFOB 1.19 (SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞) 別稱hFOB1.19; hFOB 種屬人類 年齡（性別）胎兒 組織來源骨；成骨細(xì)胞；以SV40巨細(xì)胞抗原轉(zhuǎn)染 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)多細(xì)胞形態(tài) 背景描述hFOB 1.19細(xì)胞是在0.6mg/mL新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達(dá)載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織建立的細(xì)胞系。在許可溫度33.5℃下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5℃下細(xì)胞極少分裂或不分裂。hFOB 1.19細(xì)胞具有分化為表達(dá)造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力；hFOB 1.19細(xì)胞提供了一個(gè)同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化、造骨細(xì)胞生理和激素、生長(zhǎng)因子和對(duì)造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。 生物安全等級(jí)2 [Cells contain SV40 viral sequences] 生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM/F12＋0.3mg/ml G418＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：34℃ 抗原表達(dá)情況SV40 T antigen 基因表達(dá)情況alkaline phosphatase 注意事項(xiàng)該細(xì)胞培養(yǎng)難度較高；培養(yǎng)溫度為度：33.5℃-34℃；培養(yǎng)基中添加G418。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
KLC4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NR1D1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GALNTL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TMPRSS13 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SNCAIP 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ARHGEF3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
DYNC1LI1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RGS11 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ENTPD8 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SH2D4A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
hFOB 1.19 (SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞) 100mL TAPS Buffer,0.2M,pH8.5 TAPS Buffer,0.2M,pH8.5 常溫保存
10次 ConA 糖蛋白分離試劑盒 Glycoprotein Isolation Kit （ConA） -20℃保存
2 ug pSTAT3-TA-Luc pSTAT3-TA-Luc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50次 M膜結(jié)合DNA清除試劑盒 Membrane-Bound DNA Erasol -20℃保存，通用洗柱液和RNA洗脫液可以室溫保存
2 ug pCMV-SPORT6 VAMP2 pCMV-SPORT6 VAMP2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
紅葡萄糖肉湯 Phenol Red Dextrose Broth 250g
100g Potassium Chloride 室溫干燥保存
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