冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
![88.jpg 88.jpg](https://img78.chem17.com/6fd5d5abffebbb9eb8c0dca9a38143fb82e0e616002c0b08ef4b21ae4f928fa17a26fb8bf5fa78d9.jpg)
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 HPAC (胰腺腺泡上皮癌) 別稱Hpac 年齡(性別)64歲 組織來源胰腺 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM/F12+2μg/ml Insulin+5μg/ml Transferrin+40ng/ml Hydrocortisone+10ng/ml EGF+5% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~23-44 hours 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 致瘤性Yes, the cells form tumors in athymic nude mice at the site of inoculation which are histologically similar to the tumor of origin. Yes, the cells have a colony forming efficiency of 64% on plastic and 3.2% in agarose. 受體表達情況epidermal growth factor (EGF), expressed; glucocorticoid, expressed; epidermal growth factor (EGF); glucocorticoid 基因表達情況HPAC cells are positive for keratin and negative for vimentin and chromogranin A. |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
MSL1 基因全長ORF克隆
DTX3 基因全長ORF克隆
PRICKLE4 基因全長ORF克隆
DMC1 基因全長ORF克隆
A4GNT 基因全長ORF克隆
PRSS48 基因全長ORF克隆
OR1E2 基因全長ORF克隆
NPL 基因全長ORF克隆
BSND 基因全長ORF克隆
ANXA13 基因全長ORF克隆
HPAC (胰腺腺泡上皮癌)10g N-2- -N’-3- 丙磺酸 HEPPS 室溫避光保存
250mL Carbonate Buffer(鹽緩沖液),0.5M,pH9.4 Carbonate Buffer,0.5M,pH9.4 常溫保存
50mL 剝離硅烷 Repeling Silane 常溫
2 ug pGro7 pGro7 低溫運輸,-20℃保存
RV肉湯(EP) Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth 250g
1瓶 HOS細胞株 HOS 低溫運輸和保存
菌種保存和標(biāo)本運送培養(yǎng)基