A:類器官數(shù)量不足或體積較小時(shí): 離心5min棄去上清,添加適量小腸類器官緩沖液重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進(jìn)行第3步。
B:類器官數(shù)量較多或體積較大時(shí):離心5min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液D消化2-3min,添加小腸類器官緩沖液終止消化,離心5min棄去混合液,添加適量小腸類器官緩沖液重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進(jìn)行第3步。
類器官收集后,添加基質(zhì)膠重懸,每孔25μl基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15min添加500μl小腸類器官培養(yǎng)基。
Q1:類器官培養(yǎng)一代需要多長(zhǎng)時(shí)間?
A:一般需要5-7天,長(zhǎng)得快可3-5天。
Q2: 初始量樣本量10*5,活性大于90%,可以培養(yǎng)出多少類器官?
A:培養(yǎng)一代,一般是24孔板的10個(gè)孔。
Q3:原代培養(yǎng)中消化下來(lái)的細(xì)胞是只有干細(xì)胞嗎?
A:消化下來(lái)的細(xì)胞包含各個(gè)種類的細(xì)胞,但是能培養(yǎng)成類器官的只有成體干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞,沒(méi)有干性的細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中不會(huì)增殖分化,養(yǎng)的過(guò)程會(huì)死掉。
Q4:想要CTC培養(yǎng),需要多少樣本量呢?
A:至少50+個(gè)CTC,取樣時(shí)可以多取一些血,CTC細(xì)胞占比比較少。
Q5:類器官量多小的時(shí)候不需要加消化液?
A:一般是100um以下。
Q6:如果要做藥篩需要額外去除基質(zhì)膠和培養(yǎng)基嗎?
A:和傳代培養(yǎng)鋪板一樣,藥用培養(yǎng)基稀釋就可以。
Q7:類器官培養(yǎng)一定需要基質(zhì)膠嗎?
A:基質(zhì)膠主要是為類器官提供支撐作用和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),基質(zhì)膠主要成分有l(wèi)aminin,collagen IV,heparan sulfate proteoglycans。
Q8:取材時(shí)為什么剔除脂肪組織?脂肪肝可以做類器官培養(yǎng)嗎?
A:脂肪組織影響后續(xù)消化分離得到的干細(xì)胞純度,脂肪肝也是可以做類器官培養(yǎng)的,消化前可以多清洗幾次,去掉表面脂肪。
Q9:類器官可以直接用細(xì)胞系培養(yǎng)嗎?
A:用細(xì)胞系培養(yǎng)的不能成為類器官,只能稱之為細(xì)胞球。
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
abs9514 | Organotial小鼠腸類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9516 | Organotial小鼠肝類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9515 | Organotial小鼠肺類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9517 | Organotial小鼠胰腺類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9446 | Organotial乳腺癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9448 | Organotial子宮內(nèi)膜癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9445 | Organotial結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9444 | Organotial肝癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9443 | Organotial肺癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9449 | Organotial胃癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
abs9447 | Organotial胰腺癌類器官培養(yǎng)基試劑盒 | 1kit |
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 周期 |
abs9490 | 基質(zhì)膠(標(biāo)準(zhǔn)型、含酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9491 | 基質(zhì)膠(標(biāo)準(zhǔn)型、無(wú)酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9492 | 基質(zhì)膠(高濃度、含酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9493 | 基質(zhì)膠(高濃度、無(wú)酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9494 | 基質(zhì)膠(低因子、含酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9495 | 基質(zhì)膠(低因子、無(wú)酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9496 | 基質(zhì)膠(IPS驗(yàn)證無(wú)酚紅) | 1.5ml*4 | 現(xiàn)貨 |
abs9497 | 基質(zhì)膠(高濃度、低因子、含酚紅) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
abs9498 | 基質(zhì)膠(高濃度,無(wú)酚紅,低生長(zhǎng)因子) | 1.5ml*8 | 現(xiàn)貨 |
詳見(jiàn):類器官原代培養(yǎng)全流程
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