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多重熒光免疫組化在移植排異反應評估中的應用分享：
 

多重熒光免疫組化技術（mIHC）利用酪氨信號放大技術（TSA），對不同抗原進行多輪次染色標記，可對單一切片進行至多六指標七色的染色，對于研究多種細胞之間的原位相互作用很有幫助，涉及到研究多細胞或多指標之間相互作用的領域都可以采用mIHC的技術替代傳統(tǒng)的IHC或IF，來獲得更高通量的研究結果。主要的應用領域如下圖所示： 

其中，大多數(shù)應用mIHC的研究集中在腫瘤相關領域，腫瘤微環(huán)境及藥效評估方面應用尤其多，之前的文章中小編也已經(jīng)為大家多次分享了相關應用，感興趣的小伙伴們可以查閱之前的文章。 
除了相對熱門的腫瘤領域可以用到mIHC來研究免疫細胞與腫瘤細胞之間的相互作用，其他領域也有很多特別較好的研究成果，今天小編就為大家分享一個mIHC在移植排異反應評估中的應用案例。 

作者對45例腎臟移植患者的腎臟穿刺樣本進行評估，病例情況為：20例產(chǎn)生抗體介導的排異反應（ABMR），20例產(chǎn)生T細胞介導的排異反應（TCMR），5例無明顯排異反應。多重熒光免疫組化結果如下圖所示，作者采用TSA原理的多重熒光免疫組化方法，對穿刺的腎臟組織，進行了NKp46、CD3、CD34和CD163的四標五色多染分析，可見清晰可見的結果。 

接下來作者為驗證mIHC結果的可靠性，又分別進行了NKp46指標的IHC實驗以及CD3和CD163的RT-PCR實驗，結果如下圖顯示，mIHC所體現(xiàn)的信息與傳統(tǒng)IHC及RT-PCR方法一致性良好，表明mIHC方法提供的數(shù)據(jù)可靠且更直觀。

接下來，作者針對三組對腎臟移植表現(xiàn)不同反應的病理樣本進行了細致的分析，發(fā)現(xiàn)CD34+的白細胞、CD3+T細胞，CD163+巨噬細胞和NKp46+NK細胞在兩種排異反應病理樣本中顯著提高，且TCMR組樣本有更強烈的免疫細胞募集。

接下來作者又對這些募集來的白細胞的分布進行了更細致的分析，發(fā)現(xiàn)免疫細胞在血管外的分布更多，尤其是TCMR組。

相較于TCMR組募集的白細胞主要集中于血管外，ABMR組的白細胞則更多的分布在腎小球內，這一結果也可以很好地被mIHC成像分析所發(fā)現(xiàn)。

除了組間的差異外，腎臟移植的排異反應還有很強的個體差異性，如下圖所示。

mIHC方法可以允許在一張切片上同時標記多種marker，可以原位的展現(xiàn)多種細胞之間的相互作用，在臨床科研和疾病診斷中都有很大的潛力，今天小編給大家分析的在腎臟移植排異反應研究中的應用就是如此，mIHC方法的應用，幫助科學家發(fā)現(xiàn)更精細的免疫細胞募集區(qū)域，為探秘排異機制及臨床減輕排異反應提供了更多可能性。今天的分享就到這了，感興趣的小伙伴們可以關注愛必信的多重熒光免疫組化試劑盒及實驗服務，相信看文章的你們也可以得到這樣漂亮實驗結果和好的實驗發(fā)現(xiàn)！

【愛必信mIHC服務】

* 我們可以提供的服務：
Absin多重熒光免疫組化服務提供預實驗驗證-染色-拍照-分析全過程。 
一般情況下，六指標七色（含DAPI）的多色免疫組化服務（芯片達四指標五色），樣本涵蓋石蠟切片、冰凍切片及組織芯片（TMA），組織大片請?zhí)峁﹩螇K組織切片，F(xiàn)FPE樣本，厚度3-5um。正式實驗一般每例2張，1張備用。預實驗樣本數(shù)量根據(jù)預實驗方案定。

(* 所有抗體指標需要您提供)

* 我們可以提供的服務結果：

1.五色及以下提供全片200X（相當于物鏡20X，目鏡10X）原圖，六七色提供視野200X圖片，選定視野一般默認3視野，超過視野單獨收費，收費標準根據(jù)具體情況訂，提供看圖軟件可在客戶端打開。數(shù)據(jù)上傳網(wǎng)盤1G以內，或用U盤寄送1G以上。
2.客戶所指區(qū)域的單細胞分析結果：

• 單陽性細胞占有核細胞百分比，密度。
• 雙陽性細胞占有核細胞百分比，密度。
• 組織面積和特定病理形態(tài)面積計算。
• TMA提供每個芯點的以上定量結果。

Absin多色試劑盒（abs50032） 

組分信息： SuperNova系列染料（可選）、信號放大反應液、鼠兔通用型或者抗兔抗鼠HRP標記二抗、抗熒光淬滅封片劑、DAPI 
產(chǎn)品特點： 可快速完成高達六指標七色的熒光多標記； 染料經(jīng)過優(yōu)化處理，相比普通染料，強度更高，持續(xù)時間更長； 有組化經(jīng)驗即可操作，染色無需特殊儀器，提供詳細的protocol