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雜交瘤細胞技術(shù)分析

克隆化的細胞可以在體外進行大量培養(yǎng)，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。產(chǎn)生腫瘤細胞的小鼠腹水和血清中含有大量的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體，這種抗體的效價往往高于培養(yǎng)細胞上清液的100~1000倍。

利用免疫抑制劑，如降植烷、液體石蠟、抗淋巴細胞血清等，可以加速和促進腫瘤的生長。

1．材料 （1）經(jīng)高壓滅菌的降植烷。

（2）Balb/c鼠：5~8周齡。

（3）雜交腫瘤細胞：取對數(shù)生長期的細胞。

（4）RPMI—1640培養(yǎng)液

（5）新生牛血清

2．操作方法

(1)于小鼠腹腔注射0.5ml降植烷，注射后1～9周內(nèi)種植細胞。

(2)收取對數(shù)生長期的雜交瘤細胞，用5%FCS—1640液洗滌一次，1000r/min離心10min。

(3)取樣，用臺盼蘭染色，計活細胞數(shù)，重新用5%FCS—1640液配成1.0×107細胞/ml的懸液。

(4)給注射了降植烷的小白鼠接種雜交腫瘤細胞，每只腹腔注射1ml（含1.0×107個細胞/ml）。

(5)接種后10天左右時間腫瘤體積zui大，此時可由腹腔抽取腹水，每隔1~3天取1次，可取10次。血清可由腋下動脈或心臟采血后分離。