細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
名稱 SK-BR-3 [SKBR3] (乳腺腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03; SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3; SKBR3
種屬 人類
年齡(性別) 女性,43歲
組織來源 乳腺;乳房;肋膜滲出液轉(zhuǎn)移灶
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞是由Trempe·G和Old·L·J于1970年從一位43歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離得到的。SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒、肝糖原顆粒、大溶酶體、成束的細(xì)胞質(zhì)纖絲;SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞過表達(dá)HER2/c-erb-2基因產(chǎn)物。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 McCoy’s 5A+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~48-72小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
致瘤性 Yes, in nude mice; forms poorly differentiated adenocarcinoma.
受體表達(dá)情況 Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18
注意事項 1. SK-BR-3細(xì)胞從冷凍保存中恢復(fù)的速度可能很慢。SK-BR-3細(xì)胞在低溫保存恢復(fù)過程中的附著會很輕。這很正常。這種細(xì)胞系在培養(yǎng)的整個第一周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出松散的附著和漂浮的細(xì)胞,這并不少見; 2. 如果存在大量漂浮物,尤其是在生長的第一周,在啟動復(fù)蘇后幾天內(nèi)保持細(xì)胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物,用臺盼藍(lán)檢查生存能力。通過輕輕離心保留漂浮細(xì)胞,并在更換培養(yǎng)基時將其與附著的細(xì)胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中,這一點(diǎn)很重要。不要分離或丟棄漂浮細(xì)胞。細(xì)胞最初以小斑塊或細(xì)胞群的形式附著,許多細(xì)胞團(tuán)仍處于懸浮狀態(tài)。幾天后,生長將從貼壁細(xì)胞群向外延伸。通常也會出現(xiàn)一些細(xì)胞碎片。漂浮細(xì)胞應(yīng)始終通過溫和離心(125 x g,持續(xù)5至7分鐘)保留,并在換液或傳代后放回培養(yǎng)容器; 3. SK-BR-3細(xì)胞傾向于相互堆積。在細(xì)胞達(dá)到70-80%匯合度之前不要用消化處理細(xì)胞。如果讓細(xì)胞過度生長,細(xì)胞就會分離漂浮。
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-30 DSMZ; ACC-736
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
CD73抗體
神經(jīng)細(xì)胞粘附分子CALL抗體
6型膠原蛋白α5抗體
接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體
CD24抗體
大鼠δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)elisa檢測試劑盒
大鼠γ-半合成酶(γ-GCS)elisa檢測試劑盒
大鼠γ干擾素受體(IFN-γR)elisa檢測試劑盒
大鼠γ干擾素(IFN-γ)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
大鼠γ分泌酶elisa檢測試劑盒
SK-BR-3 [SKBR3] (乳腺腺癌細(xì)胞)大鼠c-jun elisa檢測試劑盒
大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)elisa檢測試劑盒
大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)elisa分析檢測試劑盒
大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)elisa檢測試劑盒
大鼠COX-2elisa檢測試劑盒
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