牦牛皮膚細胞；BMU-S1說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 牦牛皮膚細胞；BMU-S1說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來源于一雄性黑牦牛的皮膚組織。1996年由中國科學(xué)院昆明細胞庫建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

YEB Agrobacterium Growth Medium    BR    國產(chǎn)/進口    100克    
人非小細胞肺細胞    英文名稱：        NCI-H358    
酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂/YGC瓊脂/YGC Agar    食品中霉素及酵母菌總數(shù)測定    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠牙細胞*培養(yǎng)基    100mL            
葡萄糖瓊脂/Dextrose Agar    腸桿菌科的葡萄糖發(fā)酵試驗    國產(chǎn)/進口    250克   刺毛鼠肺成纖維樣細胞    英文名稱：        CWbRL    
亞碲酸鹽卵黃增菌液/Egg-Yolk lurite Emulsion    金黃色葡萄球菌的選擇性分離；貝爾德-帕克基礎(chǔ)配套試劑    國產(chǎn)/進口    50毫升    
SK-MES-1(人肺鱗細胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H524(人非小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2            
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
LS 180(人結(jié)腸腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)    5×106cells/瓶×2            1個    冰袋    
1個    熒光尺    
乙酰丁香酮    CAS2478-38-8    1g
無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix    131128H-100    100 次
10mL    X-Gal 溶液，20mg/mL    
10g    甘氨酸二肽    
250mg    新生    
10 次    百萬堿基植物 DNAout     
秋水仙素    CAS64-86-8    100mg
BL21-CodonPlus-RIL 種    12-119    1mL
5mL    雪旺細胞生長因子    
10000U    核糖核酸酶 RNase If    
25mg    熒光胺    
10 次    ConA 糖蛋白分離試劑盒    
葡萄糖氧化酶    CAS9001-37-0    10Ku
穿刺培養(yǎng)基    100826-10    10 管
50 次    一站式柱式 miRNAout    
100mL    交聯(lián)瓊脂糖凝膠 2B    
25g    L- 亮氨酸    
60μL    驢抗山羊 IgG，辣根過氧化物酶標(biāo)記    
萘啶酮酸    CAS389-08-2    5g
小鼠抗 GST 標(biāo)簽單抗    130577-1000    1000μL
K-562(人慢性骨髓性白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
Hela, 人宮頸細胞系                
中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL            
CFPAC-1(人胰腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠甲狀腺上細胞*培養(yǎng)基    100mL            
5637(人膀胱細胞)    5×106cells/瓶×2