詳細(xì)介紹
人胃癌細(xì)胞;NCI-N87圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人胃癌細(xì)胞;NCI-N87圖片
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 NCI-N87細(xì)胞表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且沒(méi)有左旋多巴胺脫羧酶(DDC)活性。 它們的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體。 它們表達(dá)蕈毒堿膽堿受體。 沒(méi)有證據(jù)表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受體基因的重組。 這個(gè)細(xì)胞株表達(dá)的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平與其它細(xì)胞株相當(dāng)。以下基因不表達(dá): N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素釋放肽。 報(bào)道NCI-N87 細(xì)胞的植板率為4.3%。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化15-20分鐘。1:2。4-5天長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(21+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
18-0600-24胃蛋白酶測(cè)試盒24 T
纖維二糖5g
膠原酶Ⅰ型100mg
SP6 RNA 聚合酶1000U
130809-1定影粉1袋
甲酰胺100mL
動(dòng)態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒1.7mL×10 支
C600 菌種1mL
小鼠抗 Tag-100 標(biāo)簽蛋白單抗100μL
60302-1硫酸卡那干粉1g
Nile Red25mg
甜菜堿溶液,5M,PCR 1.5mL
CAS1390-65-4洋紅1g
23-0190-50Cisplatin(DNA 交聯(lián)劑 / 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑 )50mg
80813-50Western 印跡膜抗體清除劑50mL
山羊抗小鼠 IgG(H+L),異硫氰酸熒光素標(biāo)記100 μL
1,4- 雙 (5- 苯基 -2- 噁唑基 ) 苯1gQGY-7701(人肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
GoldCassette-GST/GST重組標(biāo)簽蛋白快速檢測(cè)試劑盒(精裝)2次、10次2次、10次
Elek氏培養(yǎng)基/Elek Medium致瀉大腸艾希氏菌毒素測(cè)定用250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
明膠發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
COLO 320DM(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠支氣管成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)
Multi-tagged Protein Lysate(E.coli)/多標(biāo)簽蛋白裂解液(E.coli)100ug100uggersion
BT-549(人腺管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人氣管上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
NCI-H2452(人間瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
HT-29(人結(jié)腸細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
COLO 320(人結(jié)腸細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒規(guī)格:500次
McCown Woody Plant MediumBR10升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人膽囊細(xì)胞英文名稱:GBC-SD
牛奶蛋白胨/蛋白胨C/Peptonized milkBR100/500克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
CAS6106-21-4琥珀酸,六水25g
130990-50酵母 DNAout50 次
端粒酶重復(fù)片段擴(kuò)增試劑盒 (TRAP)50 次
尿苷5g
L- 精氨酸鹽酸鹽25g