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詳細(xì)介紹
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 201圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 201圖片
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣，雙極
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)，松散貼壁
特征特性 該細(xì)胞源自一位70歲白人男性，CSAp (CSAp-)和CEA陰性。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:2～1:10傳代，每周換液1～2次
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：10，12；D16S539：12，13；D18S51：18；D19S433：13，14；D21S11：30.2，33.2；D2S1338：17，18；D3S1358：16；D5S818：10，13；D7S820：9，10；D8S1179：9，14；FGA：21，23；TH01：8，9；TPOX：11；vWA：15；
同工酶
染色體 超三倍體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
131061-1谷胱甘肽 S 轉(zhuǎn)移酶1mg
柱式血液 DNAout50 次
硫酸銨100g
纖維素酶1g
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝 )100 支
CAS37288-57-6β －瓊脂糖酶25U
140592-100PCNA 小鼠單抗100 μL
80601-100非凍型細(xì)菌 RNA 保存液100mL
免 RNA 提取 FFPE RT-PCR 試劑盒30 次
3- 異丁基 -1- 甲基黃嘌呤250g
間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL
PMSF 溶液，10mg/mL5mL
21-0150-5 間充質(zhì)干細(xì)胞脂防細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL
60308-100RNase-free EDTA 溶液 ,0.5M,pH 8.0100mL
PCNA 小鼠單抗1000 μL
DOP-PCR 試劑盒50 次
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)λDNA/BstE II50 次
YPDG 液體培養(yǎng)基100mLN-Acetyl-L-phenylalanineN-乙酰-L-丙氨酸2018-61-3
Litmuspaperneutral中性石蕊試紙
Ethyltriethoxysilane乙基三乙氧基硅烷1978/7/9
3-(Trifluoromethoxy)iodobenzene間碘三氧基198206-33-6
NA梭砂貝母
Citalopram西酞普蘭59729-33-8
1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-6674-22-2
3-(Bromomethyl)-5-chlorobenzo[b]thiophene3-溴基-5-并噻吩1198-51-2
4-Aminobenzaldehyde對(duì)氨基556-18-3
Cynaroside木犀草苷5373/11/5
1-BUTYL-2,3-DIMETHYLIMIDAZOLIUM HEXAFLUOROPHOSPHATE1-丁基-2,3-二基咪唑六磷酸227617-70-1
Solvent Red 27油紅O1320-06-5
4,4'-Diiodobiphenyl4,4-二碘聯(lián)3001-15-8
SECOISOLARICIRESINOL開環(huán)異落葉松樹脂酚29388-59-8
2-Pyridinecarboxaldehyde吡啶-2-1121-60-4
Allyl chloroformate酸丙酯2937-50-0
Stannous sulfate硫酸亞錫7488-55-3
SODIUM NITRATE-15N酸-15N31432-45-8
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