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ATCC細胞轉(zhuǎn)化操作流程及提高轉(zhuǎn)化效率
閱讀：393 發(fā)布時間：2018-6-121、 ATCC細胞在冰上預(yù)冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管。1支用來轉(zhuǎn)化樣品，1支做pUC18對照。同時將NZY+ broth培養(yǎng)基在42°C預(yù)熱。
2、 冰上融化感受態(tài)細胞。融化時輕輕將細胞混勻并分裝成100ul/管。
3、 每管中加入隨試劑盒提供的4 ml b-ME（巰基乙醇）。
4、 溫和轉(zhuǎn)動試管，將細胞在冰上放置10分鐘，每2分鐘溫和轉(zhuǎn)動一下。
5、 每管細胞加入0.1–50 ng樣品DNA （或2 ml連接反應(yīng)物）（參見DNA 質(zhì)量與體積說明。）用滅菌dH2O水按1:10稀釋對照pUC18 DNA，并取1 ml稀釋的pUC18 DNA加入轉(zhuǎn)化細胞。
6、 溫和轉(zhuǎn)動試管，并在冰上放置30分鐘。
7、 試管在42°C水浴熱激30秒。熱激時間對轉(zhuǎn)化效率極度重要。
8、 試管冰浴2 分鐘。
9、 每管加入0.9 ml 預(yù)熱 （42°C） 的NZY+ 肉湯，37°C、225–250 rpm 搖床培養(yǎng)1 小時。
10、 取 200 ml轉(zhuǎn)化混和物鋪帶有相應(yīng)篩選抗生素的LB瓊脂糖平板（如果進行顏色篩選還需加入IPTG和X-gal）。pUC18陽性對照則取5 ml 鋪氨芐青霉素LB瓊脂糖平板。
注意：ATCC細胞經(jīng) 1000 rpm離心 10分鐘會聚集，應(yīng)將細胞沉淀用 200 *l NZY+ 肉湯重懸。如果用于鋪板的細胞 <100 ml，先將細胞加入200 ml培養(yǎng)基中，然后用滅菌涂布棒鋪板。如果采用?100 ml細胞則可以直接鋪板。傾斜涂布棒并輕輕拍打，盡量減少涂布棒上的細胞殘留。
11、 37°C培養(yǎng)過夜。顏色篩選請參見以下Blue-White Color Screening的操作指南。
12、 pUC18陽性對照預(yù)計有約250個克?。?5 × 109 cfu/mg pUC18 DNA）。而樣品DNA的轉(zhuǎn)化效率隨DNA的量和組成（超螺旋或連接產(chǎn)物）有較大差異，大質(zhì)粒和非超螺旋DNA往往得到較少的克隆。
250 42℃growth Medium 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗 42℃生長培養(yǎng)基
250 E.Coli Broth 用于糞大腸菌群、大腸桿菌的測定(SN標準) EC 肉湯
250克 LB Broth 用于分子生物學(xué)實驗中大腸桿菌的保存和培養(yǎng) LB肉湯
250 MiddleBrook 7H10 Agar 用于分枝桿菌的分離培養(yǎng) MiddleBrook 7H10 瓊脂
250 MiddleBrook 7H11 Agar 用于分枝桿菌的分離培養(yǎng) MiddleBrook 7H11 瓊脂
250 TTC-Sabourand’s Medium 用于分離真菌，酵母菌等 氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基
250克 TTC-Sabourand,s Medium 用于分離真菌，酵母菌等 紅四氮唑沙保羅培養(yǎng)基
250 Agar Y，Modified 用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 （GB標準） 改良Y培養(yǎng)基
250 Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar 用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 （GB標準） CIN-1I培養(yǎng)基基礎(chǔ)
ATCC細胞