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轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存液的配制方法
閱讀：1116 發(fā)布時(shí)間：2018-5-15 轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中，雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是*的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存，則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。
1、常用凍存液組成成分
20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2、DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點(diǎn)下降，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。
3、轉(zhuǎn)化細(xì)胞注意事項(xiàng)
1.DMSO 不用高壓滅菌；DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過(guò)濾除菌。
2.DMSO要用新的，而且要避光保存。
3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
Pyridostigmine Bromide 200mg 溴吡斯的明標(biāo)準(zhǔn)品 101-26-8
200mg B-D-半乳糖苷酶標(biāo)準(zhǔn)品 9031/11/2
L-Cysteine Hydrochloride 200mg L-半胱氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 7048/4/6
Pentoxifylline 200mg 己酮可可堿標(biāo)準(zhǔn)品 6493/5/6
Proparacaine Hydrochloride 200mg 鹽酸丙美卡因標(biāo)準(zhǔn)品 5875/6/9
Beclomethasone Dipropionate 200mg 丙酸倍氯米松標(biāo)準(zhǔn)品 5534/9/8
Mexiletine Hydrochloride 200mg 鹽酸美西律標(biāo)準(zhǔn)品 5370/1/4
Diltiazem Hydrochloride 200mg 鹽酸地爾硫卓標(biāo)準(zhǔn)品 1205003
Fluorometholone Acetate 200mg 氟米龍醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 3801/6/7
轉(zhuǎn)化細(xì)胞