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技術(shù)文章

ATCC細胞獲得無限表達所需是試劑

閱讀:127          發(fā)布時間:2018-3-6

(1)ATCC細胞瞬時表達:通??梢允沟鞍自诩毎袝簳r表達數(shù)天到數(shù)周。瞬時表達常用于驗證cDNA是否能夠指導(dǎo)蛋白的合成,比較表達同一蛋白的不同載體的有效性,在進行建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系之前,通過瞬時表達來驗證重組表達載體的正確性是十分必要的。然而,瞬時表達難以按比例產(chǎn)生大量蛋白質(zhì)(>1mg),此外,整個細胞群體中只有部分細胞暫時得到蛋白表達,不利于細胞表型的研究。

(2)穩(wěn)定表達:通過利用共轉(zhuǎn)染的標(biāo)記篩選系統(tǒng),如G418等,對DNA轉(zhuǎn)染后的哺乳動物細胞進行選擇,使質(zhì)粒DNA穩(wěn)定整合到宿主細胞染色體上,則可以獲得無限表達所需蛋白的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。

(3)誘導(dǎo)表達:可誘導(dǎo)表達系統(tǒng)使外源基因的表達受誘導(dǎo)刺激強度控制,避免持續(xù)穩(wěn)定表達某些蛋白帶來的細胞毒性,zui常用的是四環(huán)素(tetracyrcline,tet)調(diào)控的可誘導(dǎo)表達系統(tǒng),具有嚴(yán)密、、可控制性強的優(yōu)點。該系統(tǒng)由調(diào)節(jié)質(zhì)粒和反應(yīng)質(zhì)粒組成,有兩種調(diào)節(jié)方式:①tet-off,四環(huán)素存在時外源基因表達受抑制,而去除四環(huán)素后誘導(dǎo)基因表達;②tet-on則相反,培養(yǎng)基中有四環(huán)素時表達外源基因,無四環(huán)素時基因表達受抑制。tet-on系統(tǒng)更容易操作,避免誘導(dǎo)蛋白時清洗四環(huán)素的步驟,由于普通血清含有四環(huán)素而容易誘導(dǎo)不必要的蛋白表達,因此tet-on細胞需要在無四環(huán)素的血清中培養(yǎng)。

除了質(zhì)粒表達載體以外,病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移也是將外源DNA引入不同類型細胞的有效而方便的方法,痘苗病毒是常用系統(tǒng)之一。痘苗病毒載體中必須表達cDNA而不是基因組克隆,病毒在感染后6小時開始形成,一直持續(xù)2天。痘苗病毒表達系統(tǒng)能表達多個蛋白或表達多亞基酶的幾個亞基,例如,ATCC細胞含有不同cDNA的DTM-1載體可以共轉(zhuǎn)染到表達噬菌體T7聚合酶的細胞中以研究多種蛋白的表達,對研究多亞基蛋白復(fù)合物的組織尤其有用。
對照品    磺胺嘧啶    100mg    對照品
對照品    炔諾孕酮    100mg    對照品
對照品    甲萘醌    50mg    對照品
對照品    甲巰咪唑    100mg    對照品
對照品    甲氧芐啶    100mg    對照品
對照品    己酸羥孕酮    50mg    對照品
對照品    己烯雌酚    50mg    對照品
ATCC細胞

 

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