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神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的操作方法

閱讀:781          發(fā)布時(shí)間:2017-2-21

神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的操作方法

神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)不易培養(yǎng),只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經(jīng)生長(zhǎng)因子和膠質(zhì)干細(xì)胞因子時(shí),可出現(xiàn)一定程度的分化,長(zhǎng)出突起等現(xiàn)象,但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。 

人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),不僅能獲得生長(zhǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞,也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說來,膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長(zhǎng)不穩(wěn)定,不易自發(fā)轉(zhuǎn)化,但對(duì)外界因素仍保持很好的敏感性,可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。 
1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后,仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分,置hanks液中漂洗一、二次。 
2、置于30—50倍體積的hanks液中,此時(shí)腦組織比較柔軟,反復(fù)吹打即制成干細(xì)胞懸液。 
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復(fù)二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。 
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液,通過紗網(wǎng)成紗布過濾,計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。 
5、接入培養(yǎng)瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。 
該細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境過程較長(zhǎng),接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細(xì)胞分裂現(xiàn)象,然而一旦生長(zhǎng)后即能迅速進(jìn)入旺盛的增殖狀態(tài)。干細(xì)胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。

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